腺病毒介导人卵泡刺激素基因在山羊乳腺上皮细胞的表达及蛋白活性分析

发布时间：2021-09-08 13:44

　　该研究旨在构建含人FSH基因的重组腺病毒载体,在山羊乳腺上皮细胞中进行表达,验证重组人FSH的体外生物学活性。利用AdEasy重组腺病毒系统获得pAdEasy-FSH/His重组腺病毒载体,经HEK293A细胞包装、扩增后获得重组人FSH腺病毒,感染GMEC后,检测FSH表达情况。结果表明,将获得的较高滴度的含FSH目的基因的重组腺病毒感染GMEC后,经Western blot检测GMEC细胞可以成功表达FSH蛋白;通过体外细胞活性试验验证其具备生物学活性。综上所述,腺病毒介导的羊乳腺上皮细胞表达的重组人FSH具备体外生物学活性,这为进一步在大动物乳腺表达重组FSH奠定了基础。 

【文章来源】：家畜生态学报. 2020,41(10)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

pAdTrack-CMV-FSH/His穿梭载体的构建及鉴定

将重组腺病毒载体用PacI酶线性化后用Lipofectamine 2000转染到HEK 293A细胞中,3 d后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白的表达,6 d后绿色荧光表达量明显增加,9 d后细胞出现大量彗星状绿色荧光,13 d时有50%细胞从培养瓶底脱落,细胞成葡萄球形状,此时可以收集P1代病毒,细胞感染腺病毒效果如图3所示。用第一代病毒继续感染HEK 293A细胞得到第二代和第三代腺病毒,第三代腺病毒具有较高的病毒滴度,可以用来感染GMEC细胞细胞。用LaSRT法测定测定第三代病毒滴度,如图4所示,随着孔数的增加,绿色荧光逐渐变暗,即随着病毒浓度的降低,荧光逐渐减少。重组腺病毒在第8个孔时,绿色荧光数不足5个,并且在第9个孔后完全黑暗,因此计算病毒滴度为1×109 PFU/mL。图3 HEK-293A 细胞包装P1代重组人FSH腺病毒(40×)

HEK-293A 细胞包装P1代重组人FSH腺病毒(40×)

【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因动物乳腺生物反应器相关技术及研究进展[J]. 梁振鑫,尹富强,刘庆友,李力.  中国生物工程杂志. 2015(02)
[2]FSH研究进展[J]. 华荣茂,曾斌.  江西科技师范大学学报. 2014(06)
[3]长效卵泡刺激素研究进展[J]. 高丽婷,周莉婷,王俊玲,高向东,吴彦卓,徐明波.  中国新药杂志. 2014(20)
[4]重组人卵泡刺激素的研究进展[J]. 曹敏,王俊玲,吴彦卓,徐明波,姚文兵.  药物生物技术. 2014(01)
[5]重组人促卵泡激素研究进展[J]. 刘金钏,彭贵子,卢智俊,左联.  中国药科大学学报. 2013(03)
[6]人卵泡抑素基因真核表达载体构建和体外表达[J]. 莫毅,梁方方,檀大羡,牛向丽,陈自洪,华荣,张海英,谢丹尼.  中国计划生育学杂志. 2011(04)
[7]卵泡刺激素（FSH）的研究进展[J]. 任春明,字向东,张重庆,杨其沅.  畜禽业. 2006(20)

硕士论文
[1]重组人促卵泡生长素的表达及其功能分析[D]. 华荣茂.江西科技师范大学 2016



本文编号：3390891