基于狂犬病病毒Leader序列荧光定量RT-PCR及其应用
发布时间：2021-09-09 10:35
狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus, RABV）引起的一种古老的人兽共患病，以脑脊髓炎、狂躁不安及进行性麻痹为主要特征，该病病死率为100%。近年来我国平均每年因狂犬病而死亡的人数约有2,000人，其中大多数是由犬、猫或野生动物咬伤所致。动物狂犬病的及时正确诊断对于疑似患者的暴露后治疗及指导动物狂犬病预防和控制具有重要意义。目前，用于动物狂犬病诊断方法有多种，主要包括病毒直接观察、病毒分离培养、病毒蛋白检测及病毒基因检测。病毒直接观察能够直接观察到病毒真实形态，但是需要在配备电镜的专业实验室进行观察；病毒的分离培养可获得病毒，但是需要考虑生物安全及病毒对细胞和动物的适应性差异；病毒蛋白检测是WHO和OIE共同推荐的最广泛应用的金标准诊断方法，但是需要标准化荧光标记抗体、荧光显微镜与经过培训的操作人员，整个过程繁琐且检测敏感性低。传统的狂犬病病毒基因检测诊断方法包括普通RT-PCR和巢氏RT-PCR，但或敏感性差或耗时较长且需接触致癌染料。荧光定量RT-PCR作为新兴的狂犬病病毒基因诊断方法由于其敏感、快速、结果直观的特性受到广泛应用。国内外已报道多种狂犬病病毒荧光定量RT-...
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
狂犬病病毒BD06株N基因扩增Fig.1-1AmplificationofNgeneofRABVBD06
图 1-2 测序结果的 BLAST 比较Fig. BLAST Comparison of sequencing2.1.3 测得预稀释过的重组质粒 pMD18T-BD06-N 浓度为 3.17 ng / μL，计算得出10-1、10-2、10-3、10-4、10-5与 10-6稀释梯度质粒拷贝数依次约为 1.3×108、1.3×107、1.3×106、1.3×105、1.3×104与 1.3×103。2.2 特异性试验对 16 份非狂犬病病毒样品进行荧光定量 RT-PCR，结果表明：所有样品 Ct值均小于 NTC Ct 值，且阳性对照最高峰 Tm 高于 80℃时，阴性对照、阴性样品（非狂犬病病毒样品）及 NTC 的最高峰 Tm 值均低于 80℃。
图 1-2 测序结果的 BLAST 比较Fig. BLAST Comparison of sequencing2.1.3 测得预稀释过的重组质粒 pMD18T-BD06-N 浓度为 3.17 ng / μL，计算得出10-1、10-2、10-3、10-4、10-5与 10-6稀释梯度质粒拷贝数依次约为 1.3×108、1.3×107、1.3×106、1.3×105、1.3×104与 1.3×103。2.2 特异性试验对 16 份非狂犬病病毒样品进行荧光定量 RT-PCR，结果表明：所有样品 Ct值均小于 NTC Ct 值，且阳性对照最高峰 Tm 高于 80℃时，阴性对照、阴性样品（非狂犬病病毒样品）及 NTC 的最高峰 Tm 值均低于 80℃。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Epidemic and Maintenance of Rabies in Chinese Ferret Badgers （Melogale moschata） indicated by Epidemiology and the Molecular Signatures of Rabies Viruses[J]. Shoufeng Zhang,Ye Liu,Yanli Hou,Jinghui Zhao,Fei Zhang,Ying Wang,Rongliang Hu. Virologica Sinica. 2013(03)
[2]江西省黄鼬和鼬獾狂犬病流行病学监测[J]. 赵敬慧,张守峰,刘晔,陈奇,苗富春,王林栋,李易潞,扈荣良. 中国人兽共患病学报. 2012(11)
[3]狂犬病病毒SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 陆专灵,何晓霞,谢琳娟,梁湘,唐海波,罗扬,罗廷荣. 基因组学与应用生物学. 2012(05)
[4]狂犬病病毒荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒的评价及应用[J]. 许运斌,孙彦伟,邵明富,查云峰,范金红,席进,朱妍,涂长春. 中国兽医学报. 2012(03)
[5]基因1型狂犬病病毒一步法荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 许运斌,邵明富,范金红,孙彦伟,席进,涂长春. 中国人兽共患病学报. 2011(04)
[6]动物狂犬病病毒街毒株的细胞分离鉴定[J]. 龚文杰,江禹,曾政,李茂,王莉莉,刘浩,熊仲良,涂长春. 中国人兽共患病学报. 2008(08)
本文编号：3391940
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
狂犬病病毒BD06株N基因扩增Fig.1-1AmplificationofNgeneofRABVBD06
图 1-2 测序结果的 BLAST 比较Fig. BLAST Comparison of sequencing2.1.3 测得预稀释过的重组质粒 pMD18T-BD06-N 浓度为 3.17 ng / μL，计算得出10-1、10-2、10-3、10-4、10-5与 10-6稀释梯度质粒拷贝数依次约为 1.3×108、1.3×107、1.3×106、1.3×105、1.3×104与 1.3×103。2.2 特异性试验对 16 份非狂犬病病毒样品进行荧光定量 RT-PCR，结果表明：所有样品 Ct值均小于 NTC Ct 值，且阳性对照最高峰 Tm 高于 80℃时，阴性对照、阴性样品（非狂犬病病毒样品）及 NTC 的最高峰 Tm 值均低于 80℃。
图 1-2 测序结果的 BLAST 比较Fig. BLAST Comparison of sequencing2.1.3 测得预稀释过的重组质粒 pMD18T-BD06-N 浓度为 3.17 ng / μL，计算得出10-1、10-2、10-3、10-4、10-5与 10-6稀释梯度质粒拷贝数依次约为 1.3×108、1.3×107、1.3×106、1.3×105、1.3×104与 1.3×103。2.2 特异性试验对 16 份非狂犬病病毒样品进行荧光定量 RT-PCR，结果表明：所有样品 Ct值均小于 NTC Ct 值，且阳性对照最高峰 Tm 高于 80℃时，阴性对照、阴性样品（非狂犬病病毒样品）及 NTC 的最高峰 Tm 值均低于 80℃。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Epidemic and Maintenance of Rabies in Chinese Ferret Badgers （Melogale moschata） indicated by Epidemiology and the Molecular Signatures of Rabies Viruses[J]. Shoufeng Zhang,Ye Liu,Yanli Hou,Jinghui Zhao,Fei Zhang,Ying Wang,Rongliang Hu. Virologica Sinica. 2013(03)
[2]江西省黄鼬和鼬獾狂犬病流行病学监测[J]. 赵敬慧,张守峰,刘晔,陈奇,苗富春,王林栋,李易潞,扈荣良. 中国人兽共患病学报. 2012(11)
[3]狂犬病病毒SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 陆专灵,何晓霞,谢琳娟,梁湘,唐海波,罗扬,罗廷荣. 基因组学与应用生物学. 2012(05)
[4]狂犬病病毒荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒的评价及应用[J]. 许运斌,孙彦伟,邵明富,查云峰,范金红,席进,朱妍,涂长春. 中国兽医学报. 2012(03)
[5]基因1型狂犬病病毒一步法荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 许运斌,邵明富,范金红,孙彦伟,席进,涂长春. 中国人兽共患病学报. 2011(04)
[6]动物狂犬病病毒街毒株的细胞分离鉴定[J]. 龚文杰,江禹,曾政,李茂,王莉莉,刘浩,熊仲良,涂长春. 中国人兽共患病学报. 2008(08)
本文编号：3391940
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3391940.html
