牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立

发布时间：2021-09-17 09:18

　　为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）血清抗体的阻断ELISA方法,本研究以经蔗糖密度梯度离心法纯化的IBRV作为免疫原制备1株单克隆抗体（MAb）,命名为cp-1-1。经间接ELISA、IFA和western blot鉴定,该MAb与IBRV呈阳性反应,与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）及牛副流感病毒3型（BPIV3）呈阴性反应,具有较强的特异性。质谱分析结果显示MAb cp-1-1识别的表位位于IBRV VP8蛋白。以纯化的IBRV作为包被抗原、MAb cp-1-1作为检测抗体,建立检测IBRV血清抗体的阻断ELISA方法。该检测方法的抗原包被量为0.89μg/孔,样品稀释度为12,检测抗体MAb量为1.3μg/孔,二抗稀释度为15 000。利用50份IBRV抗体呈弱阳性的牛血清（中和抗体效价为14～116）作为标准参考血清,确定该检测方法的阻断率Cut Off值为52.06%,即阻断率高于52.06%时判为阳性,低于52.06%时判为阴性。阻断ELISA方法特异性试验显示仅IBRV阳性血清检测为阳性,而BVDV、BPIV3、牛腺病毒3型（BADV-3）和O型口蹄疫病毒（O-FMD... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

MAb与IBRV反应的westernblot分析Fig.2WesternblotanalysisofthereactionoftheMAbcp-1-170kuM:ProteinMarker；1:cp-1-1

50份弱阳性样品结果正态分布图Fig.350weakpositivesamplesnormaldistributiondiagram0.260.280.300.320.340.360.380.400.42OD450nmvalue0

特异性试验结果Fig.4SpecifictestresultsNegativecontrolIBRVBVDVBPIV3BADV3FMDV/OOD450nmvalue0Inhibitionrate

【参考文献】：
硕士论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的制备及部分单克隆抗体抗原表位的鉴定[D]. 杨婷.中国农业科学院 2017



本文编号：3398423