A型流感病毒单链抗体基因的克隆及抗病毒活性研究

发布时间：2021-09-19 06:25

　　单链抗体（single-chain antibody fragment，ScFv）是基因工程方法制备的小分子抗体，由弹性连接肽将抗体的重链可变区与轻链可变区连接而成的重组抗体。其不含有抗体分子的恒定区片段，因而免疫原性弱，使抗体的作用更集中于靶细胞部位，实体组织穿透力强，血浆半衰期短等，在临床诊断及治疗中具有重要的应用价值。本研究选择猪流感病毒A/Swine/Guangdong/2004（H1N1）和禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96（H5N1）毒株分别作为抗H1亚型和H5亚型单抗制备的免疫原，将其HA基因克隆到真核表达载体pVAX1中构建了重组质粒pVAX1-HA1和pVAX1-HA5。使用纯化的pVAX1-HA1、pVAX1-HA5和全病毒灭活抗原H1N1、H5N1分别免疫5周龄Balb/c小鼠，通过纯化的病毒GD/04（H1N1）和GD/1/96（H5N1）作为ELISA反应的包被抗原，筛选出阳性克隆。经过四轮亚克隆，共获得12株抗H1N1流感病毒的单抗和23株抗H5N1流感病毒的单抗。然后，对ELISA实验为阳性的样本再进行中和实验筛选，最终得到4株ELIS... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

单链抗体结构示意图

%CO2培养箱中孵育1h后换2浓度为5%的37℃培养箱RT-PCR 扩增6（H5N1）病毒株中提取的0/A280为1.843和1.882，HA基因，经1%琼脂糖凝2-1）。测序结果显示扩增

NA 标准分子量 DL5000；泳道 1：pVAX1-HA1；泳道 图 2-2 pVAX1-HA 表达质粒双酶切鉴定备-HA5重组质粒免疫组、H1N1、H5N1全病毒合后第4天有杂交瘤细胞生长，未融合的融合率为69.4%。经ELISA检测融合的细隆4次，克隆阳性率达100%。最终H1N1全VAX1-HA1重组质粒组获得5株、pVAX1-HA5的中和活性


本文编号：3401198