羊口疮病毒DZ株分离、鉴定及在不同细胞系上的增殖特性研究
发布时间：2021-09-21 20:58
OrfV（Orf virus,OrfV）属于痘病毒科、副痘病毒属成员,为有囊膜线性双股DNA病毒,是引起绵羊、山羊发生以口唇、舌、鼻、乳房等部位皮肤、黏膜形成丘疹、脓疱、溃疡以及形成疣状结痂为主要特征的接触性、嗜上皮性、人兽共患传染病病原。国内外的研究已证明该病毒是一种变异性较强的病毒,不同国家和地区分离的病毒在致病性上存在着较大差异,基因组限制性酶切图谱分析表明也存在差异。可以持续增殖病毒的细胞是研究病毒最重要的工具之一。羔羊或犊牛睾丸细胞是OrfV增殖的易感细胞,但获得受来源限制,且原代细胞存在获取过程复杂及大量使用实验动物;OrfV在传代细胞上的培养,存在传代后毒力减弱、细胞病变（CPE）不稳定性等问题,因此羊口疮病毒体外增殖是一个重要技术瓶颈,直接影响了对OrfV生物学特性进行基础研究和实践中OrfV相关生物制品的开发。为了获得OrfV地方流行毒株,为OrfV基础研究和疫苗生产提供资料而开展了以下研究:1.羊口疮病毒大足株（OrfV-DZ）的分离与鉴定本研究采集重庆荣昌、大足等地区多个羊场疑似羊口疮病料18份,提取DNA,PCR鉴定为阳性病料常规处理,接种羔羊睾丸细胞（LT）进...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
临床症状A：口唇部痂皮；B：增生的肉芽组织
床样本 PCR 检测结果重庆地区大足、荣昌、永川等羊场共采集 18 份临床样品，提取病料 DN室设计的 B2L 基因特异性引物，进行 PCR 检测，共有 11 份样品扩增出大p 的目的条带（图 1-2），阳性率为 61.1%(11/18)。图 1-1 临床症状A： 口唇部痂皮；B：增生的肉芽组织Fig.1-1 Clinical symptomsA: Molar skin; B: Hyperplastic granulation tissue
3.4 细胞培养物第 5 代 TCID50值测定结果取引起羔羊睾丸细胞产生典型细胞病变的第 5 代病毒液 100 μL，按照 10-1~10-9进行连续稀释后，接种到山羊睾丸细胞上，测定其 TCID50（表 1-5）。根据 Reed-Muench 法，计算出第 5 代细胞培养物病毒滴度为 10-5.68TCID50/0.1mL。病毒液稀释度出现 CPE孔数未出现CPE 孔数累计 出现 CPE 孔数所出现 CPE占的比例孔数未出现CPE孔数表 1-5 第 5 代 OrfV-DZ 分离株 TCID50 的测定Tab. 1-5 Titration of P5 OrfV-DZ strain图 1-3 细胞病变观察结果Fig. 1-3 Observation of cell lesionsA：正常羔羊睾丸细胞；B：36h；C：72hA:Normal cell；B：36h；C：72h
【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆南疆地区羊口疮病毒的分离鉴定及其遗传进化分析[J]. 沙娜瓦尔·塔希,买买提艾力·斯迪克,比力克孜·阿不都热依木,马伟,盛卓君,依布拉依木·阿布力米提,居马别克·夏拉巴依,阿依吐拉·肉孜,薛文,王文. 草食家畜. 2018(01)
[2]羊口疮病毒感染MDBK细胞的电子显微镜观察[J]. 鲜思美,李鹏飞,李婷,顾丽群,陈元翠,刘宗胜,张习本. 黑龙江畜牧兽医. 2018(01)
[3]流式细胞术检测人巨细胞病毒活动性感染检测方法的建立及检测效果评价[J]. 王建,曹伟锋,毛月燕,吴力丰,庄国华,钱春艳. 病毒学报. 2017(03)
[4]实时荧光定量PCR、细胞培养法在流感病毒检测中的对比分析[J]. 王林,李亚波,王中秋. 中国卫生检验杂志. 2016(19)
[5]口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达[J]. 宫晓华,殷冬冬,王瑞,唐井玉,周晓雅,梅楠,张雪梅,兰梦蝶,陈鹏,王勇,王桂军. 中国兽医科学. 2016(02)
[6]水中肠道病毒检测方法的分析评价[J]. 徐丽梅,王晓昌,周进宏,徐丽华,吉铮,张崇淼. 环境工程学报. 2016(02)
[7]羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达[J]. 刘嫒,冯将,鲜思美,刘宗胜,李鹏飞,罗代兵. 中国人兽共患病学报. 2015(12)
[8]羊口疮病毒感染OFTu细胞的超微结构电镜观察[J]. 池雪林,曾显成,黄小红,罗树红,汪世华. 福建农林大学学报(自然科学版). 2015(01)
[9]羊传染性脓疱病毒福州株的分离和初步鉴定[J]. 林甦,林裕胜,江斌,江锦秀,陈梅娇,胡奇林. 福建农业学报. 2015(01)
[10]琼脂扩散试验检测羊口疮病毒[J]. 鲜思美,吴健,杨钰,刘宗胜,刘嫒,苏刚. 中国兽医杂志. 2014(08)
博士论文
[1]五种重要动物病毒快速恒温扩增检测技术的建立与应用[D]. 杨洋.中国农业科学院 2017
[2]ORFV感染宿主细胞的mRNA表达谱变化及其诱导细胞自噬机制的研究[D]. 王改丽.吉林大学 2015
[3]吉林省羊传染性脓疱病流行病学调査及其灭活疫苗的研制[D]. 郭良兴.吉林大学 2012
硕士论文
[1]羊口疮病毒强弱毒株毒力相关基因的序列比较研究[D]. 仲亮.内蒙古农业大学 2017
[2]羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立[D]. 何建斌.西北农林科技大学 2017
[3]羊口疮病毒的致弱与灭活苗的初步研究[D]. 李娜.内蒙古农业大学 2016
[4]羊口疮病毒生物学特性研究[D]. 涂明亮.内蒙古农业大学 2016
[5]宿主凋亡相关斑点样蛋白在羊口疮病毒致炎中的作用研究[D]. 张凯照.华南农业大学 2016
[6]陕西白绒山羊和奶山羊羊口疮病原调查及灭活疫苗免疫效果评估[D]. 李雯丽.西北农林科技大学 2016
[7]羊口疮病毒文登株和石林株毒力致弱及毒力相关基因的生物信息学分析[D]. 周铭.西北农林科技大学 2016
[8]羊传染性脓疱病毒VIR蛋白对宿主细胞p53和IFN-α的调控[D]. 王玲玲.中国农业科学院 2016
[9]羊口疮病毒和山羊痘病毒的分离鉴定及羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的研制[D]. 朱相儒.扬州大学 2016
[10]不同地区羊口疮病毒三个主要结构蛋白基因的遗传进化分析[D]. 李浩.内蒙古农业大学 2015
本文编号：3402475
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
临床症状A：口唇部痂皮；B：增生的肉芽组织
床样本 PCR 检测结果重庆地区大足、荣昌、永川等羊场共采集 18 份临床样品，提取病料 DN室设计的 B2L 基因特异性引物，进行 PCR 检测，共有 11 份样品扩增出大p 的目的条带（图 1-2），阳性率为 61.1%(11/18)。图 1-1 临床症状A： 口唇部痂皮；B：增生的肉芽组织Fig.1-1 Clinical symptomsA: Molar skin; B: Hyperplastic granulation tissue
3.4 细胞培养物第 5 代 TCID50值测定结果取引起羔羊睾丸细胞产生典型细胞病变的第 5 代病毒液 100 μL，按照 10-1~10-9进行连续稀释后，接种到山羊睾丸细胞上，测定其 TCID50（表 1-5）。根据 Reed-Muench 法，计算出第 5 代细胞培养物病毒滴度为 10-5.68TCID50/0.1mL。病毒液稀释度出现 CPE孔数未出现CPE 孔数累计 出现 CPE 孔数所出现 CPE占的比例孔数未出现CPE孔数表 1-5 第 5 代 OrfV-DZ 分离株 TCID50 的测定Tab. 1-5 Titration of P5 OrfV-DZ strain图 1-3 细胞病变观察结果Fig. 1-3 Observation of cell lesionsA：正常羔羊睾丸细胞；B：36h；C：72hA:Normal cell；B：36h；C：72h
【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆南疆地区羊口疮病毒的分离鉴定及其遗传进化分析[J]. 沙娜瓦尔·塔希,买买提艾力·斯迪克,比力克孜·阿不都热依木,马伟,盛卓君,依布拉依木·阿布力米提,居马别克·夏拉巴依,阿依吐拉·肉孜,薛文,王文. 草食家畜. 2018(01)
[2]羊口疮病毒感染MDBK细胞的电子显微镜观察[J]. 鲜思美,李鹏飞,李婷,顾丽群,陈元翠,刘宗胜,张习本. 黑龙江畜牧兽医. 2018(01)
[3]流式细胞术检测人巨细胞病毒活动性感染检测方法的建立及检测效果评价[J]. 王建,曹伟锋,毛月燕,吴力丰,庄国华,钱春艳. 病毒学报. 2017(03)
[4]实时荧光定量PCR、细胞培养法在流感病毒检测中的对比分析[J]. 王林,李亚波,王中秋. 中国卫生检验杂志. 2016(19)
[5]口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达[J]. 宫晓华,殷冬冬,王瑞,唐井玉,周晓雅,梅楠,张雪梅,兰梦蝶,陈鹏,王勇,王桂军. 中国兽医科学. 2016(02)
[6]水中肠道病毒检测方法的分析评价[J]. 徐丽梅,王晓昌,周进宏,徐丽华,吉铮,张崇淼. 环境工程学报. 2016(02)
[7]羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达[J]. 刘嫒,冯将,鲜思美,刘宗胜,李鹏飞,罗代兵. 中国人兽共患病学报. 2015(12)
[8]羊口疮病毒感染OFTu细胞的超微结构电镜观察[J]. 池雪林,曾显成,黄小红,罗树红,汪世华. 福建农林大学学报(自然科学版). 2015(01)
[9]羊传染性脓疱病毒福州株的分离和初步鉴定[J]. 林甦,林裕胜,江斌,江锦秀,陈梅娇,胡奇林. 福建农业学报. 2015(01)
[10]琼脂扩散试验检测羊口疮病毒[J]. 鲜思美,吴健,杨钰,刘宗胜,刘嫒,苏刚. 中国兽医杂志. 2014(08)
博士论文
[1]五种重要动物病毒快速恒温扩增检测技术的建立与应用[D]. 杨洋.中国农业科学院 2017
[2]ORFV感染宿主细胞的mRNA表达谱变化及其诱导细胞自噬机制的研究[D]. 王改丽.吉林大学 2015
[3]吉林省羊传染性脓疱病流行病学调査及其灭活疫苗的研制[D]. 郭良兴.吉林大学 2012
硕士论文
[1]羊口疮病毒强弱毒株毒力相关基因的序列比较研究[D]. 仲亮.内蒙古农业大学 2017
[2]羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立[D]. 何建斌.西北农林科技大学 2017
[3]羊口疮病毒的致弱与灭活苗的初步研究[D]. 李娜.内蒙古农业大学 2016
[4]羊口疮病毒生物学特性研究[D]. 涂明亮.内蒙古农业大学 2016
[5]宿主凋亡相关斑点样蛋白在羊口疮病毒致炎中的作用研究[D]. 张凯照.华南农业大学 2016
[6]陕西白绒山羊和奶山羊羊口疮病原调查及灭活疫苗免疫效果评估[D]. 李雯丽.西北农林科技大学 2016
[7]羊口疮病毒文登株和石林株毒力致弱及毒力相关基因的生物信息学分析[D]. 周铭.西北农林科技大学 2016
[8]羊传染性脓疱病毒VIR蛋白对宿主细胞p53和IFN-α的调控[D]. 王玲玲.中国农业科学院 2016
[9]羊口疮病毒和山羊痘病毒的分离鉴定及羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的研制[D]. 朱相儒.扬州大学 2016
[10]不同地区羊口疮病毒三个主要结构蛋白基因的遗传进化分析[D]. 李浩.内蒙古农业大学 2015
本文编号：3402475
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