副猪嗜血杆菌OmpP2及其Loop诱导细胞因子的作用及机制研究
发布时间：2021-09-22 01:24
副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）是猪上呼吸道的一种共栖菌,以多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征。外膜蛋白P2（Omp P2）是HPS外膜中最丰富的蛋白,能诱导宿主的炎症反应。序列分析发现HPS Omp P2蛋白表面由8或9个表面环状结构（loop）组成,推测loop（s）参与了Omp P2诱导的炎症反应。本研究以HPS强毒SC096菌株Omp P2和Omp P2 loops L1-L8为研究对象,体外刺激猪肺泡巨噬细胞（PAMs）,检测loop诱导的细胞因子的种类和表达水平,研究loop肽段在Omp P2诱导炎症反应中的作用;通过分析TLR/NF-κB和MAPK通路中关键蛋白分子的表达,探索loop肽段在Omp P2诱导炎症反应中的分子机制。取得的结果如下:1.loops L7和L8参与HPS Omp P2诱导细胞因子的表达为了研究OmpP2和OmpP2 loops L1-L8能否诱导细胞因子的表达,我们通过提取HPS Omp P2以及合成Omp P2 loops L1-L8刺激PAMs,分别在刺激6 h和12 h后收集样本进行Real-time P...
【文章来源】：西南民族大学四川省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8基因缺失株构建示意图
副猪嗜血杆菌OmpP2及其Loop诱导细胞因子的作用及机制研究282.2.9HPSloop氨基酸序列进行分析HPS参考菌株15个血清型的OmpP2蛋白质序列来自NCBI（www.ncbi.nlm.nih.gov）。使用CLCSequenceViewer8.0进行loopsL7和L8的氨基酸序列的比较。2.2.10数据分析使用IBMSPSSStatistics26.0统计软件程序的一般线性模型程序对数据进行单因素方差分析（ANOVA）。Duncan的多重比较测试用于识别群体平均值之间的差异。P<0.05被认为具有统计学意义。2.3结果2.3.1HPSOmpP2的提取使用报道的方法（Zhangetal.,2013），从HPS中提取并纯化天然的OmpP2蛋白。将纯化的OmpP2蛋白进行彻底透析，并通过用硝酸银染色的SDS-PAGE凝胶显示LPS污染，并通过鲎变形细胞裂解物测定法进一步评估。通过12％SDS-PAGE分析蛋白质，通过考马斯蓝染色显现，并通过MALDI-TOF-TOF方法鉴定（图2）。结果表明纯化的蛋白质是HPSOmpP2蛋白。图2.HPSSC096菌株OmpP2的SDS-PAGE电泳图M，蛋白质标准分子量Figure2.OmpP2SDS-PAGEelectrophoresismapoftheH.parasuisSC096strainmakerLaneM,Proteinstandardmolecularmaker2.3.2HPSOmpP2和loopsL1-L8对细胞活力的影响
副猪嗜血杆菌OmpP2及其Loop诱导细胞因子的作用及机制研究31图3.HPSOmpP2和loops刺激PAMs6h和12h后细胞因子IL-1α（A），IL-1β（B），IL-6（C），IL-8（D），IL-17（E），IL-23（F），CCL-4（G）和CCL-5（H）mRNA转录水平*代表与阴性对照组相比差异显著（P<0.05），**代表与阴性对照组相比差异极显著（P<0.01）Figure3.ThemRNAexpressionofIL-1α(A),IL-1β(B),IL-6(C),IL-8(D),IL-17(E),IL-23(F),CCL-4(G)andCCL-5(H)inPAMswasstimulatedbyH.parasuisOmpP2andtheloopsfor6and12h*representsignificantdifference(P<0.05)whencomparedwiththethenegativecontrol,**representextremelysignificantdifference(P<0.01)whencomparedwiththethenegativecontrol
【参考文献】：
期刊论文
[1]固有免疫相关模式识别受体研究进展[J]. 何邵平,贺建华,陈佳亿,陈福,欧淑琦. 动物营养学报. 2017(11)
[2]HPS OmpP2膜外结构环诱导PAMs IL-8 mRNA转录的研究[J]. 罗银珠,贺现辉,周素明,冯赛祥,姚文凤,徐成刚,廖明,辛朝安. 中国兽医杂志. 2015(10)
[3]副猪嗜血杆菌主要外膜蛋白基因研究进展[J]. 张斌,汤承,岳华. 动物医学进展. 2013(01)
[4]副猪嗜血杆菌ompP2基因的结构特征及其与毒力的联系[J]. 赵倩,汤承,杨发龙,邵国青,岳华. 中国科学:生命科学. 2010(06)
[5]炎性细胞因子在细菌感染中的作用[J]. 石云峰,吴本权. 国际内科学杂志. 2009(02)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌感染致炎症相关信号通路的研究[D]. 陈雨珊.华中农业大学 2016
硕士论文
[1]副猪嗜血杆菌ompP2基因的结构特征及其功能的研究[D]. 赵倩.西南民族大学 2011
本文编号：3402865
【文章来源】：西南民族大学四川省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8基因缺失株构建示意图
副猪嗜血杆菌OmpP2及其Loop诱导细胞因子的作用及机制研究282.2.9HPSloop氨基酸序列进行分析HPS参考菌株15个血清型的OmpP2蛋白质序列来自NCBI（www.ncbi.nlm.nih.gov）。使用CLCSequenceViewer8.0进行loopsL7和L8的氨基酸序列的比较。2.2.10数据分析使用IBMSPSSStatistics26.0统计软件程序的一般线性模型程序对数据进行单因素方差分析（ANOVA）。Duncan的多重比较测试用于识别群体平均值之间的差异。P<0.05被认为具有统计学意义。2.3结果2.3.1HPSOmpP2的提取使用报道的方法（Zhangetal.,2013），从HPS中提取并纯化天然的OmpP2蛋白。将纯化的OmpP2蛋白进行彻底透析，并通过用硝酸银染色的SDS-PAGE凝胶显示LPS污染，并通过鲎变形细胞裂解物测定法进一步评估。通过12％SDS-PAGE分析蛋白质，通过考马斯蓝染色显现，并通过MALDI-TOF-TOF方法鉴定（图2）。结果表明纯化的蛋白质是HPSOmpP2蛋白。图2.HPSSC096菌株OmpP2的SDS-PAGE电泳图M，蛋白质标准分子量Figure2.OmpP2SDS-PAGEelectrophoresismapoftheH.parasuisSC096strainmakerLaneM,Proteinstandardmolecularmaker2.3.2HPSOmpP2和loopsL1-L8对细胞活力的影响
副猪嗜血杆菌OmpP2及其Loop诱导细胞因子的作用及机制研究31图3.HPSOmpP2和loops刺激PAMs6h和12h后细胞因子IL-1α（A），IL-1β（B），IL-6（C），IL-8（D），IL-17（E），IL-23（F），CCL-4（G）和CCL-5（H）mRNA转录水平*代表与阴性对照组相比差异显著（P<0.05），**代表与阴性对照组相比差异极显著（P<0.01）Figure3.ThemRNAexpressionofIL-1α(A),IL-1β(B),IL-6(C),IL-8(D),IL-17(E),IL-23(F),CCL-4(G)andCCL-5(H)inPAMswasstimulatedbyH.parasuisOmpP2andtheloopsfor6and12h*representsignificantdifference(P<0.05)whencomparedwiththethenegativecontrol,**representextremelysignificantdifference(P<0.01)whencomparedwiththethenegativecontrol
【参考文献】：
期刊论文
[1]固有免疫相关模式识别受体研究进展[J]. 何邵平,贺建华,陈佳亿,陈福,欧淑琦. 动物营养学报. 2017(11)
[2]HPS OmpP2膜外结构环诱导PAMs IL-8 mRNA转录的研究[J]. 罗银珠,贺现辉,周素明,冯赛祥,姚文凤,徐成刚,廖明,辛朝安. 中国兽医杂志. 2015(10)
[3]副猪嗜血杆菌主要外膜蛋白基因研究进展[J]. 张斌,汤承,岳华. 动物医学进展. 2013(01)
[4]副猪嗜血杆菌ompP2基因的结构特征及其与毒力的联系[J]. 赵倩,汤承,杨发龙,邵国青,岳华. 中国科学:生命科学. 2010(06)
[5]炎性细胞因子在细菌感染中的作用[J]. 石云峰,吴本权. 国际内科学杂志. 2009(02)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌感染致炎症相关信号通路的研究[D]. 陈雨珊.华中农业大学 2016
硕士论文
[1]副猪嗜血杆菌ompP2基因的结构特征及其功能的研究[D]. 赵倩.西南民族大学 2011
本文编号：3402865
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