圆圈病毒3型亚单位疫苗和DNA疫苗的制备以及免疫保护性研究
发布时间：2021-09-24 22:16
近年来传染性病毒性腺胃炎给养禽业带来了巨大的危害,在管理不善的养殖场,发病率大约在15%60%,其可发生于不同品种的蛋鸡和肉鸡,并且流行范围较广。尽管病毒性腺胃炎危害严重,但其致病病原一直未有定论,据研究与呼肠孤病毒、网状内皮组织增生症病毒、腺病毒等病毒相关。在这种情况下,无法采用有效方法来防控传染性病毒性腺胃炎的发生。2017年,李根在患有鸡传染性病毒性腺胃炎的病鸡的腺胃中首次鉴定了圆圈病毒3型（Gyrovirus 3,GyV3）。通过回顾性流行病学调查及回归动物实验发现GyV3可以引起鸡的免疫抑制及腺胃肿大,然而至今还没有关于GyV3疫苗的研究,因此制备GyV3亚单位疫苗以及DNA疫苗进行免疫原性研究,从而对动物进行保护。GyV3属于单链环状DNA病毒,由三个开放阅读框构成,分别为衣壳蛋白VP1（1392bp）,骨架蛋白VP2（720bp）和凋亡蛋白VP3（378bp）。为获得免疫原性强及效果好的疫苗,制备了亚单位疫苗和DNA疫苗。选取了VP1的第90位至463位氨基酸进行表达用于制备亚单位疫苗;将VP1第90位至463位氨基酸与VP2通过柔性氨基酸linke...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GyV3病毒基因组结构示意图(LiGenetal,2018)
V3 两种亚单位疫苗免疫效果检测结果V3 原核表达载体的构建与鉴定结果GyV3 为阳性的鸡的肿大腺胃中提取 DNA 后利用上述设计的引和 VP190-463-linker-VP2 基因进行 PCR 扩增，通过凝胶电泳结果显示扩为 1122bp（图 2A) 和 1842bp，其中 VP190-463-linker-VP2 基因的 VP1p (图 2B），VP2 基因为 720bp(图 2C），重叠延伸后为 1841bp(图 2D的扩增出了目的基因。将克隆目的基因分别连接到原核表达载体 pET质粒。用限制性内切酶 SacI 和 NotI 对重组表达质粒分别进行酶切鉴果显示重组表达质粒构建成功(图 3)。
图 3 重组质粒的酶切鉴定Fig.3. The identification.of recombinant plasm190-463重组质粒双酶切鉴定 2, pET 32a-VP190-463-r; 1, the digested products of recombinant plas pET32a-VP190-463-linker-VP2.63-VP2 表达纯化及 Western blot 验证粒 pET32a-VP190-463与 ET32a-VP190-L 的 IPTG37 ℃分别诱导表达 4h 和 尿素梯度纯化法进行蛋白的纯化析(图 4A），预期大小约 60 kD 与达蛋白，经过纯化后的蛋白具有较
本文编号：3408534
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GyV3病毒基因组结构示意图(LiGenetal,2018)
V3 两种亚单位疫苗免疫效果检测结果V3 原核表达载体的构建与鉴定结果GyV3 为阳性的鸡的肿大腺胃中提取 DNA 后利用上述设计的引和 VP190-463-linker-VP2 基因进行 PCR 扩增，通过凝胶电泳结果显示扩为 1122bp（图 2A) 和 1842bp，其中 VP190-463-linker-VP2 基因的 VP1p (图 2B），VP2 基因为 720bp(图 2C），重叠延伸后为 1841bp(图 2D的扩增出了目的基因。将克隆目的基因分别连接到原核表达载体 pET质粒。用限制性内切酶 SacI 和 NotI 对重组表达质粒分别进行酶切鉴果显示重组表达质粒构建成功(图 3)。
图 3 重组质粒的酶切鉴定Fig.3. The identification.of recombinant plasm190-463重组质粒双酶切鉴定 2, pET 32a-VP190-463-r; 1, the digested products of recombinant plas pET32a-VP190-463-linker-VP2.63-VP2 表达纯化及 Western blot 验证粒 pET32a-VP190-463与 ET32a-VP190-L 的 IPTG37 ℃分别诱导表达 4h 和 尿素梯度纯化法进行蛋白的纯化析(图 4A），预期大小约 60 kD 与达蛋白，经过纯化后的蛋白具有较
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