柔嫩艾美耳球虫嵌合抗原的真核质粒构建及免疫保护作用分析
发布时间：2021-10-05 13:15
艾美耳球虫（Eimeria）是一类专性胞内寄生性顶复门原虫，可以严重危害集约化养鸡业生产。目前，鸡球虫病的主要防治手段是药物和活卵囊疫苗，但二者都存在不可逾越的障碍，这就需要寻求鸡球虫疫苗发展的新方向。本试验为了研究鸡球虫基因工程疫苗，以致病力最强的柔嫩艾美耳球虫为研究对象，选取其四个关键的入侵相关蛋白分子（顶膜抗原及棒状体颈部蛋白），利用生物信息学分析其关键功能结构域，利用重叠延伸PCR技术连接功能结构域的表达基因，将其嵌合为一个多表位的抗原，对该嵌合抗原进行真核表达质粒构建，制备DNA疫苗，并对其免疫保护效果进行评价分析。首先利用生物信息学与比较基因组学技术，注释拼接到柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）入侵相关蛋白（EtAMA1，EtMA1，EtMA2和EtRON2）的基因序列，以预测的序列设计引物，以E.tenella（广东株）第二代裂殖子总RNA为模板，用PCR方法扩增出这四种基因的开放阅读框（ORF）序列；通过在线软件，对其进行生物信息学分析；再分别设计引物，从这四种基因的全长序列中扩增胞外区的DⅡ结构域，并通过SOE PCR技术将其构建成一个可串联表达的嵌合抗原基因片段，...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
E.tenella第二代裂殖子总RNA
方法抽提的总RNA，1%琼脂糖凝胶电泳结果显示清晰三条-1）。图 1-1 E.tenella 第二代裂殖子总 RNAFig. 1-1 Total RNA ofE.tenella second generation merozitestMA1、EtMA2 和 EtRON2 基因的 PCR 扩增结果、EtMA1、EtMA2 和 EtRON2 基因序列，用设计的引物对增，产物经 1%琼脂糖凝胶电泳分析，结果分别扩增获得约 1的片段（图 1-2）。
白（如图 1-3）。图 1-3 EtMA1 和 EtMA2 的 NCBI BLAST 结果Fig.1-3 TheNCBI BLAST results of EtMA1 and EtMA2A: EtMA1 B: EtMA2对分析和 EtMA2 氨基酸序列同顶复门其他虫种 AMA1 氨基酸进行多重基酸序列具有较高的相似性，EtMA1 与其他虫种相似性在 17种相似性在 14-26%之间，通过构建进化树分析，显示 EtMA1化关系最为接近，EtMA2 与弓形虫 TgAMA1 及新孢子虫 NcA图 1-4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究[J]. 王晔,韩红玉,董辉,姜连连,赵其平,朱顺海,薛璞,舒凡帆,黄兵. 中国动物传染病学报. 2013(06)
[2]柔嫩艾美耳球虫入侵相关蛋白EtMA1和EtMA2的克隆及序列分析[J]. 戚南山,陈海宁,吕敏娜,吴彩艳,廖申权,李娟,仝宗喜,孙铭飞. 畜牧兽医学报. 2013(11)
[3]柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达[J]. 王晔,姜连连,韩红玉,薛璞,赵其平,董辉,朱顺海,舒凡帆,黄兵. 中国动物传染病学报. 2012(05)
[4]犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价[J]. 焦石,贾立军,张立霞,钱年超,刘明明,黄国明,张守发. 中国预防兽医学报. 2012(08)
[5]恶性疟原虫复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备[J]. 沈燕,赵亚,黄豫晓,梁姣,刘忠湘,李英辉. 科学技术与工程. 2012(22)
[6]微小隐孢子虫三个基因主要抗原表位区的串联表达及其抗原性分析[J]. 秦培兰,李艳,米荣升,呼高伟,黄燕,周鹏,张国恩,苏庆美,曹薇,陈兆国. 中国动物传染病学报. 2012(03)
[7]柔嫩艾美耳球虫Etron2基因在不同发育阶段转录水平差异的分析[J]. 戚南山,孙铭飞,吴彩艳,廖申权,吕敏娜,袁建丰,余劲术,李祥瑞,蔡建平. 畜牧兽医学报. 2012(04)
[8]柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2基因的克隆及序列分析[J]. 戚南山,孙铭飞,廖申权,吴彩艳,吕敏娜,袁建丰,余劲术,蔡建平,李祥瑞. 动物医学进展. 2011(12)
[9]鸡球虫DNA疫苗研究进展[J]. 李学钊,宋鸿雁,刘根新,李祥瑞. 畜牧与兽医. 2011(08)
[10]鸡球虫入侵机理、免疫学性质及基因工程在疫苗研制上的应用[J]. 陈静,丁宏标,乔宇,韩德强. 生物技术通报. 2007(06)
本文编号：3419813
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
E.tenella第二代裂殖子总RNA
方法抽提的总RNA，1%琼脂糖凝胶电泳结果显示清晰三条-1）。图 1-1 E.tenella 第二代裂殖子总 RNAFig. 1-1 Total RNA ofE.tenella second generation merozitestMA1、EtMA2 和 EtRON2 基因的 PCR 扩增结果、EtMA1、EtMA2 和 EtRON2 基因序列，用设计的引物对增，产物经 1%琼脂糖凝胶电泳分析，结果分别扩增获得约 1的片段（图 1-2）。
白（如图 1-3）。图 1-3 EtMA1 和 EtMA2 的 NCBI BLAST 结果Fig.1-3 TheNCBI BLAST results of EtMA1 and EtMA2A: EtMA1 B: EtMA2对分析和 EtMA2 氨基酸序列同顶复门其他虫种 AMA1 氨基酸进行多重基酸序列具有较高的相似性，EtMA1 与其他虫种相似性在 17种相似性在 14-26%之间，通过构建进化树分析，显示 EtMA1化关系最为接近，EtMA2 与弓形虫 TgAMA1 及新孢子虫 NcA图 1-4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究[J]. 王晔,韩红玉,董辉,姜连连,赵其平,朱顺海,薛璞,舒凡帆,黄兵. 中国动物传染病学报. 2013(06)
[2]柔嫩艾美耳球虫入侵相关蛋白EtMA1和EtMA2的克隆及序列分析[J]. 戚南山,陈海宁,吕敏娜,吴彩艳,廖申权,李娟,仝宗喜,孙铭飞. 畜牧兽医学报. 2013(11)
[3]柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达[J]. 王晔,姜连连,韩红玉,薛璞,赵其平,董辉,朱顺海,舒凡帆,黄兵. 中国动物传染病学报. 2012(05)
[4]犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价[J]. 焦石,贾立军,张立霞,钱年超,刘明明,黄国明,张守发. 中国预防兽医学报. 2012(08)
[5]恶性疟原虫复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备[J]. 沈燕,赵亚,黄豫晓,梁姣,刘忠湘,李英辉. 科学技术与工程. 2012(22)
[6]微小隐孢子虫三个基因主要抗原表位区的串联表达及其抗原性分析[J]. 秦培兰,李艳,米荣升,呼高伟,黄燕,周鹏,张国恩,苏庆美,曹薇,陈兆国. 中国动物传染病学报. 2012(03)
[7]柔嫩艾美耳球虫Etron2基因在不同发育阶段转录水平差异的分析[J]. 戚南山,孙铭飞,吴彩艳,廖申权,吕敏娜,袁建丰,余劲术,李祥瑞,蔡建平. 畜牧兽医学报. 2012(04)
[8]柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2基因的克隆及序列分析[J]. 戚南山,孙铭飞,廖申权,吴彩艳,吕敏娜,袁建丰,余劲术,蔡建平,李祥瑞. 动物医学进展. 2011(12)
[9]鸡球虫DNA疫苗研究进展[J]. 李学钊,宋鸿雁,刘根新,李祥瑞. 畜牧与兽医. 2011(08)
[10]鸡球虫入侵机理、免疫学性质及基因工程在疫苗研制上的应用[J]. 陈静,丁宏标,乔宇,韩德强. 生物技术通报. 2007(06)
本文编号：3419813
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