鸽源禽I型副粘病毒分离鉴定、基因组特性分析及致病性研究
发布时间：2021-10-08 21:30
鸽源禽I型副粘病毒（Pigeon Paramyxovirus type I, PPMV-1），又称为鸽源新城疫病毒（PigeonNewcastle Disease Virus），能够引起鸽的急性、高度接触性传染病。该类病毒属于副粘病毒科，禽腮腺炎病毒属。二十世纪七十年代，该病毒初次在中东地区被发现，其流行最高峰发生在二十世纪八十年代。本研究通过收集采自中国广东、辽宁、吉林、黑龙江四个省份的发病鸽组织病料，应用9-11日龄SPF鸡胚分离病毒，共获得8株PPMV-1毒株。通过蚀斑纯化，将每株病毒挑选6个克隆进行F基因测序发现，该8株PPMV-1毒株均为单一病毒。将该8株分离株分别进行了致病力指数测定，表明均属于中等或低等毒力病毒。通过将这8株PPMV-1毒株进行全基因组测序，对其基因组结构进行分析，发现这些分离株基因组全长均为15192nt，符合NDV基因组六碱基原则；其结构基因顺序为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’；其F基因裂解位点为112RRQKRF117，与强毒裂解位点相一致。通过F基因部分片段（47-420nt）系统进化树分析可知，这些分离株属于class II基因VIb型。...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 鸽源禽 I 型副粘病毒概述
1.2 鸽源禽 I 型副粘病毒分子生物学研究进展
1.2.1 病毒分类地位和形态
1.2.2 理化学特性
1.2.3 生物学活性
1.2.4 培养特性
1.2.5 基因组及编码蛋白的生物学特性
1.2.6 鸽源禽 I 型副粘病毒的毒力特征
1.3 鸽源禽 I 型副粘病毒国内外流行情况
1.4 诊断
1.5 免疫与预防
1.6 研究目的和意义
第二章 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 病料来源
2.1.2 SPF 鸡胚、SPF 鸡、家养肉鸽和鸡外周血红细胞
2.1.3 主要试剂
2.1.4 实验仪器
2.1.5 引物
2.2 实验方法
2.2.1 病毒的分离鉴定
2.2.2 血凝、血凝抑制试验
2.2.3 原代鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备
2.2.4 原代鸡胚成纤维细胞的传代
2.2.5 PPMV-1 病毒蚀斑纯化
2.2.6 观察噬斑并挑取噬斑扩增病毒
2.2.7 病毒的复繁
2.2.8 病毒 RNA 的提取以及 RT-PCR
2.2.9 基因组 3’末端与 5’末端的扩增
2.2.10 琼脂糖凝胶电泳鉴定
2.2.11 测序结果的分析与拼接及毒株系统进化关系分析
2.2.13 致病性指数测定
2.2.14 动物实验
2.2.15 实时荧光定量 RT-PCR 检测病毒载量
2.2.16 交叉血凝抑制试验
2.2.17 交叉病毒中和试验
第三章 实验结果
3.1 病毒的分离鉴定
3.2 分离株的噬斑纯化
3.3 测序结果分析
3.3.1 每个毒株克隆之间的关系
3.3.2 PPMV-1 分离株基因组组成分析
3.4 系统进化关系分析
3.4.1 PPMV-1 分离株基因分型
3.4.2 F 基因系统进化关系分析
3.4.3 全基因组系统进化
3.5 国内外 PPMV-1 分离株基因组差异分析
3.5.1 SimPlot 软件分析国内外毒株差异
3.5.2 PPMV-1 国内外分离株全基因组差异分析
3.6 PPMV-1 毒株致病性指数
3.6.1 PPMV-1 分离株 MDT 的测定
3.6.2 PPMV-1 分离株 ICPI 的测定
3.7 动物回归实验
3.7.1 不同 PPMV-1 毒株感染鸡致病性试验及抗体水平检测
3.7.2 相同 PPMV-1 毒株感染不同宿主的致病性试验及抗体水平检测
3.8 交叉血凝抑制试验
3.9 交叉中和试验
第四章 讨论
4.1 PPMV-1 的分离与鉴定
4.2 PPMV-1 基因组结构分析
4.3 PPMV-1 毒株的系统进化分析
4.4 PPMV-1 国内外分离株特点
4.5 PPMV-1 毒力分析
4.6 PPMV-1 感染后抗体水平分析
4.7 PPMV-1 致病性分析
4.8 PPMV-1 感染不同宿主后病毒分布的差异
4.9 PPMV-1 与其他 NDV 的交叉保护反应
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3424995
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 鸽源禽 I 型副粘病毒概述
1.2 鸽源禽 I 型副粘病毒分子生物学研究进展
1.2.1 病毒分类地位和形态
1.2.2 理化学特性
1.2.3 生物学活性
1.2.4 培养特性
1.2.5 基因组及编码蛋白的生物学特性
1.2.6 鸽源禽 I 型副粘病毒的毒力特征
1.3 鸽源禽 I 型副粘病毒国内外流行情况
1.4 诊断
1.5 免疫与预防
1.6 研究目的和意义
第二章 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 病料来源
2.1.2 SPF 鸡胚、SPF 鸡、家养肉鸽和鸡外周血红细胞
2.1.3 主要试剂
2.1.4 实验仪器
2.1.5 引物
2.2 实验方法
2.2.1 病毒的分离鉴定
2.2.2 血凝、血凝抑制试验
2.2.3 原代鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备
2.2.4 原代鸡胚成纤维细胞的传代
2.2.5 PPMV-1 病毒蚀斑纯化
2.2.6 观察噬斑并挑取噬斑扩增病毒
2.2.7 病毒的复繁
2.2.8 病毒 RNA 的提取以及 RT-PCR
2.2.9 基因组 3’末端与 5’末端的扩增
2.2.10 琼脂糖凝胶电泳鉴定
2.2.11 测序结果的分析与拼接及毒株系统进化关系分析
2.2.13 致病性指数测定
2.2.14 动物实验
2.2.15 实时荧光定量 RT-PCR 检测病毒载量
2.2.16 交叉血凝抑制试验
2.2.17 交叉病毒中和试验
第三章 实验结果
3.1 病毒的分离鉴定
3.2 分离株的噬斑纯化
3.3 测序结果分析
3.3.1 每个毒株克隆之间的关系
3.3.2 PPMV-1 分离株基因组组成分析
3.4 系统进化关系分析
3.4.1 PPMV-1 分离株基因分型
3.4.2 F 基因系统进化关系分析
3.4.3 全基因组系统进化
3.5 国内外 PPMV-1 分离株基因组差异分析
3.5.1 SimPlot 软件分析国内外毒株差异
3.5.2 PPMV-1 国内外分离株全基因组差异分析
3.6 PPMV-1 毒株致病性指数
3.6.1 PPMV-1 分离株 MDT 的测定
3.6.2 PPMV-1 分离株 ICPI 的测定
3.7 动物回归实验
3.7.1 不同 PPMV-1 毒株感染鸡致病性试验及抗体水平检测
3.7.2 相同 PPMV-1 毒株感染不同宿主的致病性试验及抗体水平检测
3.8 交叉血凝抑制试验
3.9 交叉中和试验
第四章 讨论
4.1 PPMV-1 的分离与鉴定
4.2 PPMV-1 基因组结构分析
4.3 PPMV-1 毒株的系统进化分析
4.4 PPMV-1 国内外分离株特点
4.5 PPMV-1 毒力分析
4.6 PPMV-1 感染后抗体水平分析
4.7 PPMV-1 致病性分析
4.8 PPMV-1 感染不同宿主后病毒分布的差异
4.9 PPMV-1 与其他 NDV 的交叉保护反应
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3424995
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