鸭源多杀性巴氏杆菌油乳剂灭活疫苗的制备与应用

发布时间：2021-10-09 18:28

　　本研究选取分离自某发病鸭场的菌株：经过细菌分离鉴定为鸭源多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,PM）,并用此菌株作为制苗菌株,用甲醛灭活后与矿物油佐剂高速乳化混匀,制备鸭源多杀性巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗。通过对试制疫苗的物理性状、疫苗的无菌检测,疫苗的安全性检测,对同源毒株的攻毒保护性试验,采用间接酶联免疫吸附实验（Enzye Linked Immunosorbent Assay,ELISA）对试验鸭和养殖场鸭产生的特异性抗体水平消长规律进行检测,完成对该疫苗的安全性、免疫效力等评估。1.细菌的分离鉴定：本研究菌株选取于某发病鸭场,挑取病料的心血,肝脏,接种于血琼脂平板培养基中培养,通过细菌生物学培养特性、API 20NE生化试纸条和16s rRNA基因PCR鉴定结果表明该菌株为多杀性巴氏杆菌；Biolog全自动微生物鉴定系统鉴定结果表明分离菌株为多杀性巴氏杆菌多杀亚型；PCR荚膜分子分型鉴定结果为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。2.疫苗的物理性状及无菌检测：疫苗的物理性状通过从疫苗的外观,剂型,黏稠度,稳定性四个方面来检验,结果显示该疫苗符合油佐剂疫苗制备的基本标准。然后... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
    1. 前言
        1.1 多杀性巴氏杆菌的病原学
        1.2 多杀性巴氏杆菌分型的研究
        1.3 鸭源多杀性巴氏杆菌的免疫机理研究
        1.4 禽多杀性巴氏杆菌疫苗的研究进展
            1.4.1 弱毒疫苗
            1.4.2 灭活疫苗
            1.4.3 禽霍乱荚膜亚单位疫苗
            1.4.4 禽霍乱双型原生质体融合株灭活苗
            1.4.5 基因疫苗
        1.5 ELISA在检测疫苗免疫抗体的应用
        1.6 本实验研究的目的意义
第二章 鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定
    1. 试验材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 培养基的配制
    2. 试验方法
        2.1 细菌的分离培养
        2.2 细菌生长曲线的测定
        2.3 生化试验鉴定
            2.3.1 API 20 NE检测
            2.3.2 Biolog检测
        2.4 16s rDNA鉴定
            2.4.1 引物设计
            2.4.2 16s rDNA PCR
            2.4.3 PCR产物测序
        2.5 PCR荚膜分型
    3. 结果
        3.1 培养特性
        3.2 生长曲线图
        3.3 镜检结果
        3.4 生化试验结果
            3.4.1 API 20 NE结果
            3.4.2 Biolog检测结果
        3.5 16s r RNA PCR结果
        3.6 PCR荚膜分型结果
    4. 讨论
第三章 鸭多杀性巴氏杆菌的油佐剂疫苗的制备与应用
    1. 试验材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂配制
    2. 试验方法
        2.1 毒力的测定
            2.1.1 毒力的复苏
            2.1.2 细菌毒力的测定
        2.2 疫苗的制作
            2.2.1 毒力的复苏
            2.2.2 菌液的培养
            2.2.3 菌液的灭活
            2.2.4 菌液的浓缩
            2.2.5 疫苗的制作
        2.3 疫苗物理性状检测
        2.4 疫苗的安全性检测
            2.4.1 无菌检测
            2.4.2 疫苗安全性试验
        2.5 动物攻毒保护试验
            2.5.1 试验动物
            2.5.2 攻毒保护试验
            2.5.3 细菌再分离
        2.6 抗体消长规律检测
            2.6.1 试验动物
            2.6.2 抗体检测
            2.6.3 液的采集
            2.6.4 间接ELISA检测抗体
        2.7 疫苗的生产应用
    3. 结果
        3.1 疫苗的研制
            3.1.1 疫苗的物理的性状与无菌检测结果
            3.1.2 疫苗安全性试验结果
        3.2 细菌毒力检测结果
        3.3 攻毒保护试验结果
        3.4 死亡鸭的临床症状与解剖结果
            3.4.1 临床症状
            3.4.2 解剖病理变化
        3.5 细菌再分离鉴定
        3.6 抗体消长规律检测结果
            3.6.1 ELISA最佳反应条件的结果
            3.6.2 ELISA待检血清检测结果
        3.7 疫苗的生产应用
    4. 讨论
        4.1 疫苗的规范性
        4.2 疫苗的佐剂与安全性
        4.3 禽多杀性巴氏杆菌油佐剂疫苗的免疫效力
        4.4 抗体消长规律的研究
        4.5 疫苗的生产应用
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]动物免疫增强剂的研究进展[J]. 王思芦.  中国畜牧兽医. 2013(05)
[2]禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白单价DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果分析[J]. 宫强,张爱国,牛明福,秦翠丽,孙晓菲.  中国兽医科学. 2012(08)
[3]多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株的构建及鉴定[J]. 郭东春,卢艳,刘家森,原冬伟,张爱芹,姜骞,林欢,司昌德,曲连东.  微生物学报. 2012(04)
[4]鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与耐药性分析[J]. 张文波,冷闯,邓舜洲,余根莲.  中国家禽. 2012(01)
[5]禽多杀性巴氏杆菌脂蛋白E基因的原核表达及其对小鼠的免疫原性[J]. 崔卫涛,胡思顺,王延昭,周晓芬,李自力,肖运才,毕丁仁.  湖北农业科学. 2011(04)
[6]禽多杀性巴氏杆菌交叉保护因子的研究进展[J]. 张文通,魏凤,肖跃强,沈志强.  中国家禽. 2010(10)
[7]多杀性巴氏杆菌毒力因子、免疫原及重要基因研究进展[J]. 王帅涛,宫强,秦翠丽.  中国畜牧兽医. 2010(03)
[8]禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗的研制[J]. 金天明,谷禹,马文芝,周淑云,李富桂,郭亮,张建斌.  黑龙江畜牧兽医. 2009(15)
[9]禽霍乱分离菌株不同剂型灭活疫苗的免疫对比试验[J]. 卢桂娟,陆有飞,韦岚,高永锐.  广西畜牧兽医. 2009(02)
[10]采用全菌抗原干燥包被法ELISA检测禽霍乱血清抗体的研究[J]. 徐步,高明燕,龚建森,吕晓娟,单艳菊,刘学贤.  中国家禽. 2009(05)

硕士论文
[1]鸭源巴氏杆菌、大肠杆菌二联多价蜂胶灭活疫苗研制及其免疫应答反应的动态研究[D]. 刘义铃.四川农业大学 2008



本文编号：3426788