减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344缺失株的构建及其生物学特性

发布时间：2021-10-11 16:33

　　沙门菌是一种胞内菌，既可以作为原核质粒的表达载体，也可以作为真核质粒的表达载体。其不仅具有制备简单、免疫方便、有较强的免疫原性等优势，而且其诱导的免疫反应更强更持久。鼠伤寒沙门菌作为沙门菌载体的研究应用比较广泛，但以其为载体携带外源抗原表达外源基因时，由于生存压力，其所携带的外源基因可能不能稳定遗传。最近研究的一种无抗性的宿主载体平衡致死系统为高效表达外源基因且无抗性标记提供了解决途径。asd（aspartic semialdehyde dehydrogenase）基因编码天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶，该酶是合成二氨基庚二酸（diaminopimelic acid, DAP）的必需酶，在无外源DAP条件下，含asd基因的载体会与缺失asd基因的减毒菌株互补结合，否则，减毒菌株会溶菌死亡。研究内容主要包括：1.鼠伤寒沙门菌crp cya asdSL1344缺失株的构建及筛选以含有重组自杀性质粒χ7213（pREΔasd）为供体菌， crp cyaSL1344为受体菌，利用重组自杀性质粒介导细菌基因等位交换的作用，两步法筛选出蔗糖抗性（SUCr）及DAP依赖菌落，并通过PCR及测序鉴定，确定构... 

【文章来源】：河南科技大学河南省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号表
第1章 文献综述
    1.1 沙门菌的简介
        1.1.1 沙门菌的生物学特性
        1.1.2 沙门菌的危害程度
        1.1.3 沙门菌的检测与防控
    1.2 减毒沙门氏菌疫苗的有关研究
        1.2.1 沙门菌的减毒基因
        1.2.2 减毒沙门菌的侵入机制
        1.2.3 减毒沙门菌疫苗的应用研究
    1.3 减毒沙门菌作为载体的研究
        1.3.1 减毒沙门菌作为载体的优势
        1.3.2 减毒沙门菌作为载体在疫苗中的应用研究
        1.3.3 减毒沙门菌作为载体的不足与改进之处
    1.4 展望
第2章 减毒鼠伤寒沙门菌 crp cya asdSL1344缺失株构建与鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、质粒及培养条件
        2.1.2 酶、试剂、抗生素及培养基
        2.1.3 主要试剂、抗生素及培养基的配制方法
        2.1.4 主要实验器材
    2.2 方法
        2.2.1 引物设计与合成
        2.2.2 细菌的活化
        2.2.3 大肠杆菌χ7213感受态细胞的制备
        2.2.4 细菌或重组质粒的PCR鉴定
        2.2.5 鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcya asdSL1344缺失株的构建
        2.2.6 鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcya asdSL1344缺失株的鉴定
    2.3 结果与分析
    2.4 讨论
        2.4.1 减毒沙门菌菌株缺失基因的选择
        2.4.2 重组自杀性质粒在疫苗中的相关研究
        2.4.3 染色体质粒载体平衡致死系统在疫苗中的应用研究
第3章 减毒鼠伤寒沙门菌 crp cya asdSL1344缺失株生物学特性初步研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 实验动物
        3.1.3 酶、试剂及培养基
        3.1.4 主要试剂及培养基的配制方法
        3.1.5 主要实验器材
    3.2 方法
        3.2.1 沙门氏菌的PCR特异性鉴定
        3.2.2 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的表型鉴定
        3.2.3 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的遗传稳定性
        3.2.4 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的生长特性
        3.2.5 缺失株 crp cya asdSL1344的毒力测定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 沙门菌的PCR鉴定
        3.3.2 缺失株 crp cya asdSL1344的表型鉴定
        3.3.3 asd缺失片段的稳定遗传
        3.3.4 减毒株与亲本株、强毒株的生长特性比较
        3.3.5 重组菌株 crp cya asd SL1344（pYA3493）的构建及鉴定
        3.3.6 重组菌株ΔcrpΔcya asd SL1344（pYA3493）的毒力测定
    3.4 讨论
        3.4.1 基因缺失对缺失菌株 crp cya asd SL1344生化特性的影响
        3.4.2 基因缺失对重组菌株ΔcrpΔcya asdSL1344（pYA3493）毒力的影响
第4章 结论
参考文献
缩略语词汇表
致谢
攻读硕士学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]减毒沙门氏菌载体在兽用疫苗研发中的应用[J]. 李云云,郭万柱.  广东畜牧兽医科技. 2013(04)
[2]两起伤寒沙门菌感染暴发流行病原的相似度研究[J]. 张婷,李国民,杨继先,陆洲.  实用预防医学. 2013(01)
[3]多位点基因序列分型在沙门菌鉴定中的应用[J]. 胡玉山,侯水平,庞杏林,胡肖娟,刘俊华,吴新伟.  实用预防医学. 2012(12)
[4]应用Taqman荧光定量PCR快速检测宠物食品中的沙门氏菌[J]. 贾俊涛,崔鹤,马云,曾静,姜英辉,李正义.  安徽农业科学. 2012(30)
[5]鸡源性肠炎沙门氏菌的鉴定[J]. 王涛,王亮,杜冬冬,庄燕飞,常维山.  中国人兽共患病学报. 2012(10)
[6]鼠伤寒沙门氏菌SL1344株△crp△cya缺失株的构建及其生物学特性初步研究[J]. 李正,程相朝,张春杰,李银聚,李静,张明亮,田芳华,杨宁宁.  中国预防兽医学报. 2012(07)
[7]猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd缺失株平衡致死载体系统的构建及生物学特性研究[J]. 张明亮,张春杰,程相朝,赵战勤,李正,王慧,郁川.  中国兽医科学. 2012(04)
[8]沙门氏菌减毒及其作为疫苗活载体的研究进展[J]. 张明亮,张春杰,程相朝.  生物学杂志. 2012(02)
[9]减毒沙门氏菌在疫苗和疫苗载体方面的研究进展[J]. 李正,程相朝.  中国畜牧兽医. 2012(01)
[10]鼠伤寒沙门菌SL1344株cAMP受体蛋白基因缺失株的构建及其生物学特性[J]. 廖成水,程相朝,赵战勤,张春杰,李银聚,吴庭才,郁川,王晓利,胡阿勇.  中国兽医学报. 2011(12)

硕士论文
[1]减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207asd基因突变株的构建及其生物学特性[D]. 张玉红.扬州大学 2006



本文编号：3430875