KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响
发布时间：2021-10-12 07:53
旨在探讨KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响。本研究在体外成熟液中添加不同浓度的KDM1A特异性抑制剂GSK-KDM1A,牦牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）体外培养24 h后,观察卵丘细胞的扩展和第一极体的排出情况;利用免疫荧光检测体外培养过程中卵母细胞内KDM1A的表达模式;采用实时荧光定量PCR检测体外培养卵母细胞内Kdm1a、Oct-4、Sox-2以及Nanog的表达水平;体外培养成熟后的牦牛卵母细胞进行体外受精,观察其卵裂率与囊胚形成率。结果显示,体外培养24 h后,GSK-KDM1A组的卵丘细胞扩展程度显著低于对照组（P<0.05）,而320 nmol·L-1组的卵丘细胞扩展程度和第一极体排出率均显著低于160 nmol·L-1组（P<0.05）。在卵母细胞体外成熟过程中,Kdm1a呈现动态表达模式,MⅠ期的表达水平显著低于GV和MⅡ期（P<0.05）;添加GSK-KDM1A能显著抑制卵母细胞中KDM1A蛋白的表达（P<0.05）,320 nmol·L-1组各时间点K...
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
牦牛卵丘细胞的扩展及卵母细胞成熟过程中的3个时期
表2 KDM1A对COCs中卵丘细胞扩展及卵母细胞成熟的影响Table 2 Effects of KDM1A on the cumulus cells expansion and oocyte maturation GSK添加浓度/(nmol·L-1)GSK concentration COCs数量(n)No. of COCs 时间/hTime 卵丘细胞面积/μm2Area of cumulus cells 成熟率/%Rate of maturation 0 186(3) 0 178.72±5.27d 88.17±0.65a 24 446.80±3.76a 160 164(3) 24 393.19±5.63b 65.24±0.38b 320 158(3) 24 367.84±2.78c 51.27±0.35c 不同小写字母表示差异显著（P<0.05），下同The different lower case letters indicate significant difference(P<0.05),the below as the same2.3 KDM1A对胚胎干细胞转录因子表达的影响
COCs在添加不同浓度GSK-KDM1A的卵母细胞成熟液中培养,对各组培养0、12和24 h的卵母细胞进行免疫荧光染色(图4),对其相对灰度值进行统计分析(图5)。结果显示,KDM1A 蛋白在卵母细胞减数分裂成熟过程中呈动态表达,且12 h 时的相对表达量显著低于0和24 h (P<0.05),与RT-qPCR结果吻合。此外,KDM1A的表达量与GSK-KDM1A的浓度呈负相关,320 nmol·L-1组各时间点的KDM1A表达量显著低于160 nmol·L-1组(P<0.05)。2.5 KDM1A对牦牛卵母细胞发育潜能的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]牦牛KDM1A基因克隆及其在不同发育时期睾丸中的表达规律[J]. 韩杰,熊显荣,王艳,杨显英,阿果约达,黄向月,李键. 畜牧兽医学报. 2018(12)
[2]基于RNA-Seq高通量测序技术的牦牛卵巢转录组研究:进一步完善牦牛基因结构及挖掘与繁殖相关新基因[J]. 兰道亮,熊显荣,位艳丽,徐通,钟金城,字向东,王永,李键. 中国科学:生命科学. 2014(03)
本文编号：3432170
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
牦牛卵丘细胞的扩展及卵母细胞成熟过程中的3个时期
表2 KDM1A对COCs中卵丘细胞扩展及卵母细胞成熟的影响Table 2 Effects of KDM1A on the cumulus cells expansion and oocyte maturation GSK添加浓度/(nmol·L-1)GSK concentration COCs数量(n)No. of COCs 时间/hTime 卵丘细胞面积/μm2Area of cumulus cells 成熟率/%Rate of maturation 0 186(3) 0 178.72±5.27d 88.17±0.65a 24 446.80±3.76a 160 164(3) 24 393.19±5.63b 65.24±0.38b 320 158(3) 24 367.84±2.78c 51.27±0.35c 不同小写字母表示差异显著（P<0.05），下同The different lower case letters indicate significant difference(P<0.05),the below as the same2.3 KDM1A对胚胎干细胞转录因子表达的影响
COCs在添加不同浓度GSK-KDM1A的卵母细胞成熟液中培养,对各组培养0、12和24 h的卵母细胞进行免疫荧光染色(图4),对其相对灰度值进行统计分析(图5)。结果显示,KDM1A 蛋白在卵母细胞减数分裂成熟过程中呈动态表达,且12 h 时的相对表达量显著低于0和24 h (P<0.05),与RT-qPCR结果吻合。此外,KDM1A的表达量与GSK-KDM1A的浓度呈负相关,320 nmol·L-1组各时间点的KDM1A表达量显著低于160 nmol·L-1组(P<0.05)。2.5 KDM1A对牦牛卵母细胞发育潜能的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]牦牛KDM1A基因克隆及其在不同发育时期睾丸中的表达规律[J]. 韩杰,熊显荣,王艳,杨显英,阿果约达,黄向月,李键. 畜牧兽医学报. 2018(12)
[2]基于RNA-Seq高通量测序技术的牦牛卵巢转录组研究:进一步完善牦牛基因结构及挖掘与繁殖相关新基因[J]. 兰道亮,熊显荣,位艳丽,徐通,钟金城,字向东,王永,李键. 中国科学:生命科学. 2014(03)
本文编号：3432170
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