基于青霉素结合蛋白PBP3的β-内酰胺类药物残留检测及蛋白结构的初步研究
发布时间：2021-10-14 07:45
p-内酰胺类药物是发现最早、应用最广的一大类抗生素,临床常用于预防和治疗动物疾病。长期滥用及不合理使用此类药物易造成动物体内药物残留,由此产生的食品安全问题已引起国内外普遍关注。亟需发展快速、可靠、高效的检测方法来监控动物源食品此类药物残留,从而保障食品安全和人类健康。目前,基于抗体建立的β-内酰胺类检测方法往往只能检测一种或少数几种结构相似的药物。青霉素结合蛋白（penicillin binding proteins,PBPs）可以特异性识别这类药物,已成为β-内酰胺类药物残留检测方法研究的热点。本研究基于肺炎链球菌R6的PBP3蛋白建立了牛奶中p-内酰胺类药物残留快速检测方法,并通过分子对接和定点突变技术对PBP3蛋白结构进行初步研究。体外扩增pbp3基因,构建表达载体pET28b-pbp3,获得N端带6×His融合标签的重组蛋白PBP3。优化诱导表达条件,在0.2mM异丙基-p-D-硫代吡喃半乳糖苷（Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside,IPTG）、20℃下诱导16h时,重组蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）细胞内实现高效表达。采用Ni-NTA...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PBPs与天然底物作用机制["2]
PBP3二级结构图
图2-lp6p3基因丨广增Figure 2-1 Amplification of pbp3 gene体pEASY-Tl-pbp3构建及鉴定回收，连接pEASY-Tl载体并转化至大肠杆菌Trans5a中
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-内酰胺类抗生素残留受体分析法的研究进展[J]. 程古月,彭娟,王玉莲,董小冰,彭大鹏,郝海红,黄玲利,袁宗辉. 畜牧兽医学报. 2014(03)
[2]动物性产品中抗生素残留的原因、危害及检测方法浅析[J]. 张化民,李庆华,肖文刚. 湖北畜牧兽医. 2014(01)
[3]Development of a Rapid Multi-residue Assay for Detecting β-lactams Using Penicillin Binding Protein 2x[J]. ZENG Kum,ZHANG Jing,WANG Yang,WANG ZhanHui,ZHANG Su Xia,WU Chong Ming,SHEN Jian Zhong. Biomedical and Environmental Sciences. 2013(02)
[4]微生物抑制法检测牛乳中青霉素类药物残留的研究[J]. 马丽苹,纠敏,秦翠丽,赵君峰,张春雷. 现代食品科技. 2013(01)
[5]分子印迹固相萃取/毛细管电泳法检测牛奶中头孢噻肟残留[J]. 陈玎玎,何东旭,祁克宗,陆翠珍. 分析测试学报. 2012(10)
[6]标记免疫分析在农兽药残留检测中的应用研究进展[J]. 杨代凤,刘腾飞,邓金花,顾俊荣,董明辉. 中国农学通报. 2012(30)
[7]ScMYB原核蛋白诱导表达的影响因素研究[J]. 陈雪燕,曹新有,张羽. 安徽农业科学. 2012(03)
[8]莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法的建立[J]. 刘道峰,邓省亮,赖卫华,夏骏. 食品与机械. 2012(01)
[9]Simultaneous determination of 14β-lactam antibiotics in cosmetic products by liquid chromatography tandem mass spectrometry method[J]. Cai Sheng Wu,Jin Lan Zhang,Yan Ling Qiao,Yi Lin Wang,Zhi Rong Chen~* Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,Beijing 100050,China. Chinese Chemical Letters. 2011(03)
[10]动物源性食品中β-内酰胺类药物残留检测研究进展[J]. 袁萍,刘亚风,祝伟霞,杨娜,杨冀州,魏蔚. 检验检疫学刊. 2010(03)
博士论文
[1]动物性食品中喹诺酮类药物残留的荧光偏振免疫分析研究[D]. 米铁军.中国农业大学 2013
[2]计算机辅助分子设计提高蛋白质热稳定性的研究[D]. 田健.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]牛奶中头孢类抗生素的免疫层析试纸条和ELISA试剂盒检测方法研究[D]. 谢会玲.江南大学 2009
[2]SELEX技术筛选青霉素类抗生素适体及其运用方法的初步探索[D]. 秦川.西南大学 2008
本文编号：3435741
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PBPs与天然底物作用机制["2]
PBP3二级结构图
图2-lp6p3基因丨广增Figure 2-1 Amplification of pbp3 gene体pEASY-Tl-pbp3构建及鉴定回收，连接pEASY-Tl载体并转化至大肠杆菌Trans5a中
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-内酰胺类抗生素残留受体分析法的研究进展[J]. 程古月,彭娟,王玉莲,董小冰,彭大鹏,郝海红,黄玲利,袁宗辉. 畜牧兽医学报. 2014(03)
[2]动物性产品中抗生素残留的原因、危害及检测方法浅析[J]. 张化民,李庆华,肖文刚. 湖北畜牧兽医. 2014(01)
[3]Development of a Rapid Multi-residue Assay for Detecting β-lactams Using Penicillin Binding Protein 2x[J]. ZENG Kum,ZHANG Jing,WANG Yang,WANG ZhanHui,ZHANG Su Xia,WU Chong Ming,SHEN Jian Zhong. Biomedical and Environmental Sciences. 2013(02)
[4]微生物抑制法检测牛乳中青霉素类药物残留的研究[J]. 马丽苹,纠敏,秦翠丽,赵君峰,张春雷. 现代食品科技. 2013(01)
[5]分子印迹固相萃取/毛细管电泳法检测牛奶中头孢噻肟残留[J]. 陈玎玎,何东旭,祁克宗,陆翠珍. 分析测试学报. 2012(10)
[6]标记免疫分析在农兽药残留检测中的应用研究进展[J]. 杨代凤,刘腾飞,邓金花,顾俊荣,董明辉. 中国农学通报. 2012(30)
[7]ScMYB原核蛋白诱导表达的影响因素研究[J]. 陈雪燕,曹新有,张羽. 安徽农业科学. 2012(03)
[8]莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法的建立[J]. 刘道峰,邓省亮,赖卫华,夏骏. 食品与机械. 2012(01)
[9]Simultaneous determination of 14β-lactam antibiotics in cosmetic products by liquid chromatography tandem mass spectrometry method[J]. Cai Sheng Wu,Jin Lan Zhang,Yan Ling Qiao,Yi Lin Wang,Zhi Rong Chen~* Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,Beijing 100050,China. Chinese Chemical Letters. 2011(03)
[10]动物源性食品中β-内酰胺类药物残留检测研究进展[J]. 袁萍,刘亚风,祝伟霞,杨娜,杨冀州,魏蔚. 检验检疫学刊. 2010(03)
博士论文
[1]动物性食品中喹诺酮类药物残留的荧光偏振免疫分析研究[D]. 米铁军.中国农业大学 2013
[2]计算机辅助分子设计提高蛋白质热稳定性的研究[D]. 田健.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]牛奶中头孢类抗生素的免疫层析试纸条和ELISA试剂盒检测方法研究[D]. 谢会玲.江南大学 2009
[2]SELEX技术筛选青霉素类抗生素适体及其运用方法的初步探索[D]. 秦川.西南大学 2008
本文编号：3435741
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