L-肌肽激活m TOR和Wnt/β-catenin信号通路促进猪骨骼肌卫星细胞增殖分化的机理

发布时间：2021-10-15 10:36

　　骨骼肌卫星细胞在肌肉生长发育、再生和损伤修复中扮演着非常重要的角色。本试验主要研究L-肌肽对骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响,揭示L-肌肽促进猪骨骼肌卫星细胞增值和分化的机理。试验一选取健康1日龄的长白猪,优化分离程序,分离猪背最长肌卫星细胞,采用差速贴壁法对分离得到的卫星细胞进行纯化;接种96孔板,培养24 h后,用含0、0.2、2、1、10、20和40 mM/L的L-肌肽的细胞培养基进行处理,每个处理10个重复。结果显示:与对照组相比,0.2、1和2 mM/L的L-肌肽显著提高了（P<0.05）卫星细胞接种72、96和120 h的OD值,40 mM/L的L-肌肽显著抑制了（P<0.05）卫星细胞接种120 h的OD值,对于其他时间点的OD值虽然具有抑制作用,但差异不显著（P>0.05）。这说明0.2、1和2 mM/L促进了卫星细胞增值,而40 mM/L的L-肌肽具有抑制卫星细胞的增值的作用。因此,选择0、0.2、2和20 mM/L的L-肌肽进行后续试验。试验二取生长良好的第3代卫星细胞,接种96/6孔板,培养24 h后,分别用含0、0.2、2和20 mM/L的L-肌... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．３卫星细胞的分裂??Ｆｉｇ?１．３?Ｔｈｅ?ＳＣｓ?ｐｒｏｌｉ仿ｒａｔｉｐｎ?ｉｎ?ｕｎｉｎｊｕｒｅｄ?ａｎｄ?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ?ｍｕｓｃｌｅ??２．２．２卫星细胞与肌纤维细胞??

猪背最长肌卫星细胞的分离与纯化

３．２背最长肌卫星细胞的鉴定??通过形态学观察已经初步确定分离得到的细胞卫星细胞。为了进一步确定，取上述分离得到??的细胞，Ｗ?ＩｘｌＯ５?ｃｅｌｌｓ／ｍＬ的浓度接种６孔板，其纯度用Ｐａｘ?７进行鉴定（图２．２）。??图２．２背最长肌卫星细胞的鉴定（Ａ图为ＤＡＰＩ染色，Ｂ图为Ｐａｘ?７染色，Ｃ图为融合图）??Ｆｉｇ?２．２?Ｔｈｅ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓａｔｅｌＨ化?ｃｅｌｌｓ??（Ｆｉｇ?Ａ?ｗａｓ?ＤＡＰＩ；?Ｆｉ呂?Ｂ?ｗａｓ?Ｐａｘ?７，?Ｆｉｇ?Ｃ?ｗａｓ?ｍｅｒ呂ｅｄ?ｐｉｃｔｕｒｅ）?邊??由图２．２可知，Ｐａｘ?７是卫星细胞的标志性基因，分寓得到的卫星细胞经Ｐａｘ?７鉴定的阳性率??高达９５％Ｌ；ｌ上，可用于后续试验。??３３以肌化巧度的筛逸??卫星细胞在离体培养和体内所面临的环境有很大的不同，不同部位骨骼肌卫星细胞对以肌化??？?的最适浓度范阐及耐受量也不相同。网此＞?心肌狀在动物日粮中的添加量与细胞培养中的添邮ｉ??有很大不同，动物实验的添加量不能直接应用到本试验中。所我们首先对以肌狀的添加剂ｉ范??围进行筛选。??由图２．３可知，与对照组相比．添加０．２、１和２?ｍＭ化的心肌狀可显著提高（Ｐ?＜?０．０５）卫??星细胞接种７２、９６和１２０?ｈ时的ＯＤ值：１０和２０?ｍＭ化的心肌化的ＯＤ值与对照组相比没有显??著差异（Ｐ＞〇．〇５）；?４０ｍＭ／Ｌ的Ｌ肌化畳著降低了（尸＜０．０５）卫星细胞接种１２０ｈ的ＯＤ值。这??说明：低浓度梯度的以肌狀（０．２、１、１０?ｍＭ／Ｌ）可促进卫星细胞增殖

【参考文献】：
期刊论文
[1]VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响[J]. 王晓艳,王际英,马晶晶,刘云,李宝山,孙永智,王世信,张利民.  水生生物学报. 2017(01)
[2]β-丙氨酸对肉仔鸡生长性能、肉品质及胸肌中丙二醛和肌肽含量的影响[J]. 齐博,武书庚,王晶,齐广海,张海军.  动物营养学报. 2016(10)
[3]骨骼肌卫星细胞成肌化机制研究进展[J]. 李江,方克伟.  医学研究生学报. 2016(09)
[4]骨骼肌卫星细胞生物学特性及在肌肉损伤修复中的应用前景[J]. 元虹懿,白春雨,关伟军,马月辉.  黑龙江畜牧兽医. 2016(13)
[5]脑苷肌肽对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化应激损伤的抑制作用[J]. 胡霞,陈方方,孔陈苏.  中国临床药理学杂志. 2016(11)
[6]肌肽对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用[J]. 赵艳,赵颂,李晴,方超,张龙,杨菁.  中国生化药物杂志. 2015(12)
[7]肌肽对肉鸡生长、抗氧化性能及肉质的影响[J]. 邱玉朗,陈群,李林,王莹,于维.  饲料研究. 2015(24)
[8]肌纤维类型及其转化对畜禽肉品质的影响[J]. 刘培峰,冯佳炜,段晓雪,牟韶阳,徐良梅.  中国饲料. 2015(16)
[9]动物骨骼肌卫星细胞的培养及其对肉品质的影响[J]. 丁斐,姜自琴,荣华,谷大海,豆腾飞,刘丽仙.  黑龙江畜牧兽医. 2015(15)
[10]肌肽对局灶性脑缺血大鼠bcl-2、bax表达的影响[J]. 朱洁,马茜,王辛,刘翠梅,王爱红.  天津医药. 2015(03)

博士论文
[1]利用条件性敲除小鼠模型对mTOR在肌肉和脂肪发育中的功能研究[D]. 张朋朋.华中农业大学 2015
[2]外源抗氧化剂对肉仔鸡、肥育猪的生长性能、肉品质和体内抗氧化体系的影响[D]. 鲍英慧.中国农业大学 2014
[3]手性药物肌肽对映体拆分和立体选择性药物动力学研究[D]. 苏丹.沈阳药科大学 2010

硕士论文
[1]FAK信号通路调控猪骨骼肌卫星细胞迁移和粘附的分子机制[D]. 王丹.华南农业大学 2016
[2]Pax7、MyoD和MyoG基因在猪背最长肌中的发育性表达研究[D]. 牛姣艳.山西农业大学 2015
[3]猪Myostatin基因敲除及转录调控的研究[D]. 高飞.吉林大学 2013
[4]五指山猪和长白猪肌肉发育差异的初步研究[D]. 曹婷.海南大学 2013
[5]利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化研究[D]. 刘月光.西北农林科技大学 2011
[6]IGF-Ⅰ与MGF对骨骼肌卫星细胞增殖及迁移的影响[D]. 王琼.上海体育学院 2011
[7]拘束应激对小鼠糖代谢的影响以及肌肽的改善作用[D]. 阳冬辉.暨南大学 2010
[8]肌肽的抗羰基应激作用：肌肽与丙二醛的反应机理研究[D]. 王贵.湖南师范大学 2010
[9]MyoD、MyoG基因的多态性及其与鸡屠宰性状和肉质性状的相关性研究[D]. 王琼.四川农业大学 2007
[10]肌肽抗氧化性及其在肉品冷藏中的应用研究[D]. 布冠好.河南农业大学 2006



本文编号：3437911