内质网应激诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的作用研究
发布时间：2021-10-18 07:27
睾丸间质细胞是雄性动物分泌睾酮的主要来源，机体内睾酮水平与睾丸间质细胞的增殖和凋亡密切相关，了解睾丸间质细胞的增殖和凋亡的分子机制，对于充分认识精子生成及雄性不育等均有十分重要的意义。内质网（endoplasmic reticulum，ER）是蛋白折叠和修饰的重要场所，是真核细胞的主要细胞器之一。机体许多生理和病理因素均可导致内质网功能稳态失衡并诱发内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS），最近的研究表明内质网应激信号通路参与多种细胞的死亡过程。本实验通过明确内质网应激是否参与睾丸间质细胞凋亡过程及信号途径，为进一步揭示内质网应激在睾丸间质细胞凋亡中的调控机制奠定基础。本实验通过胶原酶法分离培养小鼠睾丸间质细胞，添加内质网应激特异诱导剂毒胡萝卜素（Tg）和衣霉素（Tm），采用Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡率；应用Real-Time PCR方法检测GRP78、CHOP和Caspase-12mRNA水平的变化。试验结果显示Tm和Tg显著的诱导了小鼠睾丸间质细胞的凋亡，且呈浓度和时间依赖性。GRP78mRNA的...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：26 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠睾丸间质细胞的体外培养与纯度鉴定（×100）
图 2 Annexin V-FITC/PI 双染检测间质细胞凋亡率Fig 2 The apoptotic Leydig cells examined by Annexin V-FITC/PI double-labeling2.3.2.2 相关基因 GRP78、CHOP、Caspase-12 的表达量体外分离培养小鼠睾丸间质细胞，在培养液中分别加入 5 μg/mL 和 10 μg/mL 的质网应激特异诱导剂 Tg 与 Tm；在培养的 0 h 、24 h 和 48 h 收集细胞，采用 Real-tiPCR 技术检测 GRP78、CHOP、Caspase-12 表达水平。添加 ERS 特异诱导剂 Tg 和 T24 h 时，GRP78 mRNA 的表达水平显著增加（图 3，P<0.05），与 24 h 相比，48 h 时 GRPmRNA 的表达水平逐渐下降但依然显著高于对照组（P<0.05），ERS 相关凋亡通路中关键基因 CHOP、Caspase-12 表达量随时间的增加和诱导剂浓度的增加而增加。
图3 体外培养小鼠睾丸间质细胞中 GRP78, CHOP, Caspase-12 表达水平的检测Fig3 Abundance of GRP78, CHOP, Caspase-12 mRNA in mouse leydig cells cultured in vitro.2.4 讨论近年来关于 ERS 与凋亡的关系的研究备受关注。ERS 与一些疾病的发生和发展密切相关。研究发现，心衰、高血压等心血管疾病、糖尿病、肿瘤性疾病等疾病的发生，均与 ERS 诱导的凋亡相关。目前，ERS 诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡通路机制报道很少。睾丸间质细胞是雄性动物分泌睾酮的主要来源，机体内睾酮水平与睾丸间质细胞的增殖和凋亡密切相关。了解睾丸间质细胞的增殖和凋亡的分子机制，对于充分认识精子生成及雄性不育等均有十分重要的意义。睾丸间质细胞主要分布于曲精小管之间，在睾丸中含量较低，故体外分离培养较难。本实验通过胶原酶法分离纯化小鼠睾丸间质细胞，明确内质网应激是否参与睾丸间质细胞凋亡过程及信号途径，为进一步揭示内质网应激在睾丸间质细胞凋亡中的调控机制奠定基础。小鼠睾丸间质细胞的分离培养方法多种
【参考文献】：
期刊论文
[1]水苏碱对肾纤维化大鼠肾组织CHOP、caspase-3作用[J]. 张翠,佟倩倩,高佳雪,尚东雨,吕海杰,芦莹,康天济. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版). 2014(01)
[2]高糖、高同型半胱氨酸致足细胞内质网应激时白藜芦醇对CHOP通路的影响[J]. 李艳,秦洁,张姬欣,马春明,柳洁. 中华临床医师杂志(电子版). 2014(03)
[3]利妥昔单抗联合CHOP方案治疗非霍奇金淋巴瘤疗效分析[J]. 魏涛,龚忠义. 河北医学. 2014(01)
[4]苦参素对食管癌Eca-109细胞BIP和CHOP mRNA表达的影响[J]. 曹珊,周慧茹,朱艳琴. 郑州大学学报(医学版). 2014(01)
[5]不同程度内质网应激对巨噬细胞自噬的影响[J]. 马美娟,李妍,张英梅,闫浩,刘敏,张乐,马颖,苑健,胡建华,纪兆乐,张荣庆,李聪叶,王海昌. 现代生物医学进展. 2014(02)
[6]内质网整合应激反应[J]. 陶天琪,刘秀华. 生理科学进展. 2013(04)
[7]siRNA抑制IRE1α蛋白表达对巨噬细胞凋亡的影响[J]. 李方明,郭毅,姜昕,唐冰衫. 中国医药指南. 2013(17)
[8]异氟醚预处理对大鼠肠缺血再灌注后肠损伤的影响[J]. 柳垂亮,李向宇,程志芳,黄洋,曾维安. 中国药学杂志. 2012(21)
[9]毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡影响及部分机制的初步探讨[J]. 王亚丽,李俊,黄成,黄艳,于明哲,任丹阳,徐涛. 中国药理学通报. 2012(09)
[10]内质网应激在软脂酸钠诱导的脂肪变性L02肝细胞凋亡中的作用[J]. 曹洁,杨朝霞,沈薇,姚隆. 第三军医大学学报. 2011(18)
本文编号：3442472
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：26 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠睾丸间质细胞的体外培养与纯度鉴定（×100）
图 2 Annexin V-FITC/PI 双染检测间质细胞凋亡率Fig 2 The apoptotic Leydig cells examined by Annexin V-FITC/PI double-labeling2.3.2.2 相关基因 GRP78、CHOP、Caspase-12 的表达量体外分离培养小鼠睾丸间质细胞，在培养液中分别加入 5 μg/mL 和 10 μg/mL 的质网应激特异诱导剂 Tg 与 Tm；在培养的 0 h 、24 h 和 48 h 收集细胞，采用 Real-tiPCR 技术检测 GRP78、CHOP、Caspase-12 表达水平。添加 ERS 特异诱导剂 Tg 和 T24 h 时，GRP78 mRNA 的表达水平显著增加（图 3，P<0.05），与 24 h 相比，48 h 时 GRPmRNA 的表达水平逐渐下降但依然显著高于对照组（P<0.05），ERS 相关凋亡通路中关键基因 CHOP、Caspase-12 表达量随时间的增加和诱导剂浓度的增加而增加。
图3 体外培养小鼠睾丸间质细胞中 GRP78, CHOP, Caspase-12 表达水平的检测Fig3 Abundance of GRP78, CHOP, Caspase-12 mRNA in mouse leydig cells cultured in vitro.2.4 讨论近年来关于 ERS 与凋亡的关系的研究备受关注。ERS 与一些疾病的发生和发展密切相关。研究发现，心衰、高血压等心血管疾病、糖尿病、肿瘤性疾病等疾病的发生，均与 ERS 诱导的凋亡相关。目前，ERS 诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡通路机制报道很少。睾丸间质细胞是雄性动物分泌睾酮的主要来源，机体内睾酮水平与睾丸间质细胞的增殖和凋亡密切相关。了解睾丸间质细胞的增殖和凋亡的分子机制，对于充分认识精子生成及雄性不育等均有十分重要的意义。睾丸间质细胞主要分布于曲精小管之间，在睾丸中含量较低，故体外分离培养较难。本实验通过胶原酶法分离纯化小鼠睾丸间质细胞，明确内质网应激是否参与睾丸间质细胞凋亡过程及信号途径，为进一步揭示内质网应激在睾丸间质细胞凋亡中的调控机制奠定基础。小鼠睾丸间质细胞的分离培养方法多种
【参考文献】：
期刊论文
[1]水苏碱对肾纤维化大鼠肾组织CHOP、caspase-3作用[J]. 张翠,佟倩倩,高佳雪,尚东雨,吕海杰,芦莹,康天济. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版). 2014(01)
[2]高糖、高同型半胱氨酸致足细胞内质网应激时白藜芦醇对CHOP通路的影响[J]. 李艳,秦洁,张姬欣,马春明,柳洁. 中华临床医师杂志(电子版). 2014(03)
[3]利妥昔单抗联合CHOP方案治疗非霍奇金淋巴瘤疗效分析[J]. 魏涛,龚忠义. 河北医学. 2014(01)
[4]苦参素对食管癌Eca-109细胞BIP和CHOP mRNA表达的影响[J]. 曹珊,周慧茹,朱艳琴. 郑州大学学报(医学版). 2014(01)
[5]不同程度内质网应激对巨噬细胞自噬的影响[J]. 马美娟,李妍,张英梅,闫浩,刘敏,张乐,马颖,苑健,胡建华,纪兆乐,张荣庆,李聪叶,王海昌. 现代生物医学进展. 2014(02)
[6]内质网整合应激反应[J]. 陶天琪,刘秀华. 生理科学进展. 2013(04)
[7]siRNA抑制IRE1α蛋白表达对巨噬细胞凋亡的影响[J]. 李方明,郭毅,姜昕,唐冰衫. 中国医药指南. 2013(17)
[8]异氟醚预处理对大鼠肠缺血再灌注后肠损伤的影响[J]. 柳垂亮,李向宇,程志芳,黄洋,曾维安. 中国药学杂志. 2012(21)
[9]毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡影响及部分机制的初步探讨[J]. 王亚丽,李俊,黄成,黄艳,于明哲,任丹阳,徐涛. 中国药理学通报. 2012(09)
[10]内质网应激在软脂酸钠诱导的脂肪变性L02肝细胞凋亡中的作用[J]. 曹洁,杨朝霞,沈薇,姚隆. 第三军医大学学报. 2011(18)
本文编号：3442472
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