绵羊FSHR基因可变剪接体的克

发布时间：2021-10-18 11:14

　　根据Gen Bank中绵羊促卵泡激素受体基因（FSHR）的mRNA序列（登录号:NM₀01009289.1）设计引物,反转录PCR（RT-PCR）扩增蛋白编码区（CDs）区,以获取绵羊FSHR基因可变剪接体,并通过Western blot验证其在组织中的表达,通过免疫组织化学方法检测其在卵泡中的表达位置。结果表明,在绵羊卵巢中除了全长的、编码695个氨基酸的FSHR表达产物外,还鉴定到分别编码694个、633个、595个、582个和533个氨基酸的FSHR可变剪接形式的转录产物。在卵泡中主要以695（694）、633和595 3种转录本形式存在。但在颗粒细胞中绵羊促卵泡激素受体主要以经典分子即695个氨基酸的形式存在。在卵泡发育过程中,FSHR蛋白质含量发生变化:在初级卵泡中,FSHR主要在卵母细胞中表达,而不是在单层的颗粒细胞中表达,在次级卵泡中,FSHR在颗粒细胞和卵母细胞中均不表达,到三级卵泡（有腔卵泡）时,FSHR蛋白质在颗粒细胞中表达丰富。可见,绵羊FSHR基因虽然存在可变剪接体的结构,但其功能主要取决于经典型的695个氨基酸蛋白质分子,并且对初级卵泡的... 

【文章来源】：江苏农业学报. 2017,33(03)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

剥离的绵羊不同直径卵泡

图5绵羊不同剪接形式的FSHＲ氨基酸序列比对Fig．5TheaminoacidsequencesalignmentofdifferentalternativelysplicedovineFSHＲ达。在颗粒细胞中，仅有一种大小的FSHＲ阳性条带，其相对分子质量约7．7×104(图6)，与编码全长695氨基酸序列预测的分子量(带信号肽分子量预测为7．823×104，不带信号肽的分子量预测为7．653×104)最为接近。对绵羊卵巢进行FSHＲ免疫组化定位分析发现:在窦状卵泡中，FSHＲ的阳性信号集中在壁颗粒细胞中;在具有单层颗粒细胞的原始卵泡中，FSHＲ阳性信号则集中卵母细胞中而634江苏农业学报2017年第33卷第3期

非颗粒细胞中;在具有多层颗粒细胞的次级卵泡中，颗粒细胞和卵母细胞中均无显著的FSHＲ阳性信号(图7)。图6Westernblot分析绵羊不同组织中FSHＲ蛋白质的表达Fig．6WesternblotanalysisofovineFSHＲproteinexpressionindifferentsheeptissuesOo:卵母细胞;GC:颗粒细胞;TC:膜细胞。图7绵羊卵巢中FSHＲ蛋白质的免疫组织化学表达(×200)Fig．7ImmunohistochemicalanalysisofFSHＲproteininsheepovary(×200)3讨论本研究中，我们鉴定到绵羊卵泡中存在多种具有G蛋白偶联受体形式的FSHＲmＲNA可变剪接形式，而蛋白质形式的FSHＲ仅有全长形式的分子存在。在初级卵泡中FSHＲ基因仅在卵母细胞中高水平表达，在三级卵泡中主要在颗粒细胞中表达。本研究所鉴定的可变剪接体均为胞外域部分的选择性剪接形式。FSHＲ的可变剪接形式在多个哺乳动物物种中被发现，但剪接形式随物种不同有所差异。在小鼠中发现有缺失exon2、exon5、exon6的多种FSHＲ可变剪接形式［16］。在猫颗粒细胞中发现有缺失exon3的可变剪接形式［17］。在人卵巢中存在缺失exon2、exon6、exon9及exon8的表达形式［14，18］。在牛卵巢中发现有exon4、exon5、exon9缺失的表达形式［15］。我们发现，绵羊卵巢中存在缺失exon3、exon4、ex-on5、exon6、exon9等外显子的可变剪接形式的表达。在可变剪接过程中，导致仅exon3和exon4交界处的单个精氨酸(Arg)缺失，比经典型的分子缺少1个氨基酸。目前还不清楚这种剪接类型是否能翻译成蛋白质，以及具有什么生物学功能。另外，与人、牛等单胎类型哺乳动物相似，绵羊中很早就发现存在exon9缺失类型［19］，这种缺失所对应编码的氨基酸序列恰好是受体信号特异性反应结构域位置［20］。但我们在卵泡颗粒细胞仅鉴?


本文编号：3442703