KISS1/GPR54系统在山羊睾丸间质细胞自分泌的功能研究

发布时间：2021-10-18 18:55

　　KISS1（蛋白为Kisspeptin）及其G蛋白偶联受体54系统（G Protin-coupled Receptor 54,GPR54）通过下丘脑-垂体-性腺轴对动物繁殖的重要调控作用。我们前期研究表明,KISS1基因作为免疫去势的新靶标免疫公羔后能够显著降低睾酮含量和阻滞睾丸发育,然而,仍不清楚其机制。激素类免疫主要通过抗体中和作用进而影响下丘脑-垂体中枢轴这个内分泌途径发挥作用。然而,KISS1在睾丸组织表达量较其它组织高,睾丸组织间质细胞产生和分泌的睾酮对睾丸发育发挥着至关重要的作用。因此,KISS1基因免疫除了通过内分泌途径发挥作用外,能否通过睾丸间质细胞自分泌途径达到去势的目的尚不明晰。本研究以大足黑山羊为研究对象,利用免疫组化、定量PCR、Western Blotting和酶免测定等技术,分析KISS1/GPR54在山羊睾丸间质细胞的表达,进一步分析Kisspeptin过表达处理对睾丸间质细胞Kisspeptin自分泌及功能的影响,阐明KISS基因免疫通过间质细胞自分泌途径去势的机制。本研究有望进一步提高KISS1基因疫苗免疫去势的效果,为激素免疫调控技术在动物上的广泛应... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词一览表
1 文献综述
    1.1 kiss/gpr54研究进展
        1.1.1 kiss1简介
        1.1.2 gpr54简介
    1.2 kiss1/gpr54系统与生殖功能的关系
        1.2.1 kiss1/gpr54系统调控青春期的起始
        1.2.2 kiss1/gpr54系统刺激促性腺激素的释放
    1.3 影响kiss1/gpr54表达的因素
        1.3.1 性腺类固醇激素对kiss1基因表达的影响
        1.3.2 季节变化对kiss1、gpr54表达的影响
        1.3.3 营养水平对kiss1、gpr54表达的影响
    1.4 睾丸间质细胞
        1.4.1 睾丸间质细胞形态
        1.4.2 睾丸间质细胞功能
        1.4.3 睾丸间质细胞生长发育的调控
    1.5 免疫去势
        1.5.1 免疫去势简介
        1.5.2 免疫去势机制的研究
        1.5.3 免疫去势的应用
        1.5.4 免疫去势存在的问题
    1.6 研究目的和意义
2 引言
3 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 试验动物
        3.1.2 主要仪器设备
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 溶液配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 山羊各组织kiss1及gpr54基因定量pcr
        3.2.2 免疫组化检测kisspeptin及gpr54在睾丸组织中表达
        3.2.3 山羊睾丸间质细胞的分离培养
        3.2.4 rt-pcr检测kiss1和gpr54基因在睾丸间质细胞中的表达
        3.2.5 western blotting检测kiss1和gpr54基因及蛋白在间质细胞的表达
        3.2.6 kisspeptin过表达处理睾丸间质细胞
        3.2.7 qrt-pcr检测kisspeptin过表达处理对睾丸间质细胞kiss1和gpr54的mrna表达的影响
        3.2.8 elisa检测kisspeptin过表达处理对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响
    3.3 数据分析
4 结果与分析
    4.1 kiss1及gpr54基因在山羊不同组织的表达变化
    4.2 kisspeptin和gpr54蛋白在山羊睾丸组织的表达
    4.3 睾丸间质细胞中kiss1和gpr54表达情况
        4.3.1 山羊睾丸间质细胞形态学观察
        4.3.2 睾丸间质细胞总rna提取纯度检测
        4.3.3 kiss1及gpr54基因在山羊睾丸间质细胞的表达
        4.3.4 kisspeptin及gpr54蛋白在山羊睾丸间质细胞中的表达
    4.4 kisspeptin不同浓度处理对间质细胞睾酮分泌的影响
    4.5 kisspeptin处理对间质细胞kiss1合成和gpr54表达的影响
    4.6 kisspeptin处理对间质细胞睾酮分泌的影响
5 讨论
    5.1 山羊不同组织中kiss1及gpr54的表达差异
    5.2 kiss1及gpr54在睾丸间质细胞的合成及kisspeptin的分泌
    5.3 kisspeptin54过表达处理对山羊睾丸间质细胞kisspeptin自分泌的影响
    5.4 kisspeptin54过表达处理对山羊睾丸间质细胞睾酮分泌的影响
    5.5 kiss1/gpr54在睾丸间质细胞的自分泌对kiss1免疫去势机制研究的影响
6 结论
    6.1 全文主要结果
    6.2 创新性结论
    6.3 进一步研究建议
参考文献
致谢
参加课题及发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制[J]. 柳海燕,陶晓倩,时姗姗,张艳梅,卢坤刚,韩雪峰,崔英霞,戈一峰,黄宇烽,李晓军,姚兵.  南京医科大学学报(自然科学版). 2009(10)
[2]KISS-1/GPR54基因及其在生殖中的作用[J]. 冯涛,储明星,张英杰.  遗传. 2008(04)

博士论文
[1]KISS1基因免疫去势效果及机制的研究[D]. 韩燕国.华中农业大学 2015



本文编号：3443315