绵羊KISSPEPTIN-53基因表达及生物活性检测
发布时间：2021-10-19 13:22
吻素（Kisspeptin,Kp）是由KISS1基因编码的神经肽,在哺乳动物生殖器官发育、初情期启动、季节性发情、精子发生、卵泡成熟与排卵等生殖内分泌调控过程中发挥着极其重要的作用。Kisspeptin在动物繁殖中具有潜在的应用价值,而现在商品化的Kisspeptin药品却十分昂贵。本研究旨在用毕赤酵母表达绵羊吻素Kp53,并对其生物活性进行测定,为其在动物繁殖中的应用奠定基础。根据毕赤酵母的偏好密码子对绵羊Kp53的编码序列进行优化,将其克隆到p PICZαA质粒构建成重组表达载体p PICZαA-Kp53。将鉴定正确的重组质粒与空质粒经Sac I线性化后电转入毕赤酵母GS115。甲醇诱导阳性转化子表达,用BCA法检测发酵上清液总蛋白浓度,并以Tricine-SDS-PAGE和Western Blot对表达产物进行鉴定。为了提高表达量,实验对诱导时间、诱导温度及甲醇浓度等条件进行了优化。用Ni亲和层析柱法纯化目的产物。最后,向昆明小鼠腹腔注射纯化产物,通过其对生殖激素LH和FSH水平的影响评估表达产物的生物活性。研究构建的重组表达载体p PICZαA-Kp53能够在毕赤酵母基因工程菌...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
绵羊KISS1基因的转录、翻译、翻译后加工及神经肽前体的结构和不同的前体裂解产物Fig.1-1Thetranscription,translation,andpost-translationalprocessingofsheepKISS1gene,andthestructureofprepro-kisspeptin,andmajorpeptideproductsgeneratedbydifferentialcleavagefromthecommonprecursor.
绵羊 Kisspeptin-53 基因表达及生物活性检测在视前区（POA）中 Kisspeptin 表达水平没有变化（Clarke et al 2009）。Smith 等也：尽管弓状核中的 KISS1 神经元的季节性表达水平变化是明显的，但位于视前区（PO那些神经元似乎不受季节性变化的影响（Smith and Clarke 2007）。摘除卵巢的母羊射雌激素替代品的母羊，在没有性类固醇激素反馈的情况下，KISS1 表达水平在繁殖的上升也是明显的（Smith et al 2008）。雌激素对弓状核（ARC）中 KISS1 表达的抑用在非繁殖季节比繁殖季节更强（Smith et al 2008），表明 KISS1 神经元对雌激素敏的变化是决定季节性繁殖的关键因素。解剖学研究发现：与非发情季节相比，发情季绵羊大脑漏斗部有大量的 Kisspeptin 神经元末端与 GnRH 神经元之间存在轴突-胞体突-树突与轴突-轴突的联系（Smith 2012）（图 1-2）。这个发现表明 Kisspeptin 表达元可能直接参与对 GnRH 神经分泌的调控。
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位（毕业）论文的研究发现，在绵羊等一些哺乳动物的弓状核（ARC）中发现了一个特殊神经元群，在这个神经元群中，Kisspeptin 神经与神经激肽 B（neurokininB）和强啡肽（dynorphin）神经元位于同一区域，即 Kisspeptin 神经元共表达另外两类神经元，该神经元群被统称为KNDy 神经元。在 KNDy 神经元网络中，NeurokininB 对 KISS1 神经元起促进作用，而Dynorphin 对其起抑制作用，它们共同协调作用来调节 Kisspeptin 的释放，进而调节 GnRH神经元的脉冲释放（Lehman et al 2010, Goodman et al 2013）（图 1-4），影响动物的生殖内分泌节律。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Kisspeptin对PCOS的发生及能量代谢的影响[J]. 韩珊,田文艳,赵明飞,张慧英. 中国计划生育学杂志. 2018(01)
[2]人B7-H3基因的克隆及其重组蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化[J]. 张喆,代瑛,王希,和婷,董轲,张惠中. 现代肿瘤医学. 2017(10)
[3]毕赤酵母工程菌高密度发酵研究与进展[J]. 武婕,张晓雪,余河水,李薇,贾宇平,郭江玉,张丽娟,宋新波. 中国生物工程杂志. 2016(01)
[4]毕赤酵母表达系统研究进展[J]. 马银鹏,王玉文,党阿丽,孔祥辉,张介驰. 黑龙江科学. 2013(09)
[5]甲醇营养型重组毕赤酵母高效表达外源蛋白过程的控制与优化(英文)[J]. 高敏杰,史仲平. Chinese Journal of Chemical Engineering. 2013(02)
[6]巴氏毕赤酵母表达系统的研究进展[J]. 姚晶,吴正钧,任婧. 江苏农业科学. 2012(03)
[7]毕赤酵母优化表达外源蛋白策略[J]. 余占桥,马青山,赵龙妹,张日俊. 微生物学通报. 2010(07)
[8]不同猪胰岛素前体基因拷贝数Mut+型毕赤酵母的摇瓶发酵研究[J]. 张明,郭美锦,庄英萍,储炬,张嗣良. 工业微生物. 2010 (02)
[9]酵母表达系统研究进展与展望[J]. 董清华,沈元月. 北京农学院学报. 2008(02)
[10]外源基因在酵母中的表达[J]. 李育阳. 生物科学信息. 1991(03)
本文编号：3444952
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
绵羊KISS1基因的转录、翻译、翻译后加工及神经肽前体的结构和不同的前体裂解产物Fig.1-1Thetranscription,translation,andpost-translationalprocessingofsheepKISS1gene,andthestructureofprepro-kisspeptin,andmajorpeptideproductsgeneratedbydifferentialcleavagefromthecommonprecursor.
绵羊 Kisspeptin-53 基因表达及生物活性检测在视前区（POA）中 Kisspeptin 表达水平没有变化（Clarke et al 2009）。Smith 等也：尽管弓状核中的 KISS1 神经元的季节性表达水平变化是明显的，但位于视前区（PO那些神经元似乎不受季节性变化的影响（Smith and Clarke 2007）。摘除卵巢的母羊射雌激素替代品的母羊，在没有性类固醇激素反馈的情况下，KISS1 表达水平在繁殖的上升也是明显的（Smith et al 2008）。雌激素对弓状核（ARC）中 KISS1 表达的抑用在非繁殖季节比繁殖季节更强（Smith et al 2008），表明 KISS1 神经元对雌激素敏的变化是决定季节性繁殖的关键因素。解剖学研究发现：与非发情季节相比，发情季绵羊大脑漏斗部有大量的 Kisspeptin 神经元末端与 GnRH 神经元之间存在轴突-胞体突-树突与轴突-轴突的联系（Smith 2012）（图 1-2）。这个发现表明 Kisspeptin 表达元可能直接参与对 GnRH 神经分泌的调控。
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位（毕业）论文的研究发现，在绵羊等一些哺乳动物的弓状核（ARC）中发现了一个特殊神经元群，在这个神经元群中，Kisspeptin 神经与神经激肽 B（neurokininB）和强啡肽（dynorphin）神经元位于同一区域，即 Kisspeptin 神经元共表达另外两类神经元，该神经元群被统称为KNDy 神经元。在 KNDy 神经元网络中，NeurokininB 对 KISS1 神经元起促进作用，而Dynorphin 对其起抑制作用，它们共同协调作用来调节 Kisspeptin 的释放，进而调节 GnRH神经元的脉冲释放（Lehman et al 2010, Goodman et al 2013）（图 1-4），影响动物的生殖内分泌节律。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Kisspeptin对PCOS的发生及能量代谢的影响[J]. 韩珊,田文艳,赵明飞,张慧英. 中国计划生育学杂志. 2018(01)
[2]人B7-H3基因的克隆及其重组蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化[J]. 张喆,代瑛,王希,和婷,董轲,张惠中. 现代肿瘤医学. 2017(10)
[3]毕赤酵母工程菌高密度发酵研究与进展[J]. 武婕,张晓雪,余河水,李薇,贾宇平,郭江玉,张丽娟,宋新波. 中国生物工程杂志. 2016(01)
[4]毕赤酵母表达系统研究进展[J]. 马银鹏,王玉文,党阿丽,孔祥辉,张介驰. 黑龙江科学. 2013(09)
[5]甲醇营养型重组毕赤酵母高效表达外源蛋白过程的控制与优化(英文)[J]. 高敏杰,史仲平. Chinese Journal of Chemical Engineering. 2013(02)
[6]巴氏毕赤酵母表达系统的研究进展[J]. 姚晶,吴正钧,任婧. 江苏农业科学. 2012(03)
[7]毕赤酵母优化表达外源蛋白策略[J]. 余占桥,马青山,赵龙妹,张日俊. 微生物学通报. 2010(07)
[8]不同猪胰岛素前体基因拷贝数Mut+型毕赤酵母的摇瓶发酵研究[J]. 张明,郭美锦,庄英萍,储炬,张嗣良. 工业微生物. 2010 (02)
[9]酵母表达系统研究进展与展望[J]. 董清华,沈元月. 北京农学院学报. 2008(02)
[10]外源基因在酵母中的表达[J]. 李育阳. 生物科学信息. 1991(03)
本文编号：3444952
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