稳定支持小反刍兽疫病毒增殖的永生化羊源细胞系构建及鉴定
发布时间：2021-10-22 16:20
小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）作为副黏病毒科麻疹病毒属的一个重要组成成员,在临床上能够引起野生和家养小反刍动物发病,以高热,肺炎,腹泻和呼吸道黏膜炎症为主要特征。PPRV属于有囊膜的单股负链RNA病毒,基因组大小为15948nt,编码8个蛋白（N,P,C,V,M,F,HN和L）。动物细胞系是病毒基础研究和应用的主要平台之一。然而,有许多病毒因缺乏能支持其稳定增殖的细胞系,例如PPRV和RHDV等。而导致其相关基础和应用研究工作进展十分缓慢。为解决该技术瓶颈,原代细胞的永生化技术应运而生。本研究旨在构建一株能稳定支持PPRV增殖的羊源永生化细胞系。首先,构建了pLOV-puro-hTERT重组质粒,然后利用慢病毒包装系统,从293T细胞中拯救出重组慢病毒并感染原代绵羊肺成纤维细胞,在感染48h后,用嘌呤霉素连续加压,筛选出具有抗性的存活细胞,将其扩增并连续传代至第10代,分别用分子生物学和年医学方法鉴定以后,最终获得了永生化原代绵羊肺成纤维细胞系,并将其命名为SLT细胞系。遗憾的是,RT-PCR和WB结果显示SLT细胞系可以支...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PPRV粒子的模式结构(Amjadetal.,1996;Banyardetal.,2010)
染 PPRV(Amjad, et al., 1996; Brindha et al., 2001)。1.3 PPR 临床症状和组织病理学PPRV 主要的易感部位是呼吸道和消化道黏膜。口腔炎肺肠炎混合感染，组织病理学损伤在这些部位中表现明显。除了常见的肺炎外，可能发生间质性化脓性肺炎，在嘴唇周围有硬痂，临床症状和病理学损伤类似于牛瘟(Al-Dubaib, 2009)。临床上将 PPRV 给易感宿主造成的危害程度划分为 4 个等级：最急性型、急性型、亚急性型和亚临床型，主要表现为急性型感染(Nawathe and Taylor, 1979)。PPRV 首先在局部淋巴结中增殖并导致病毒血症，然后感染周围敏感的上皮组织，引起肉眼可见的细胞病变和病理学损伤。PPR 的特征性病变为“斑马线”的出现，主要是由于盲肠，结肠近端和直肠严重阻塞的结果(Taylor et al., 2002)。该病除了造成病毒血症外，在口腔和肠黏膜中的组织中形成多核的合胞体，痊愈的动物会获得较强的免疫力，不存在慢性和恢复期带毒的状态。值得注意的是，PPRV 抗原在山羊和绵羊的中枢神经系统中存在但不产生任何神经症状(Kul et al., 2007)。1.4 PPRV 的基因组结构及蛋白功能
业科学院硕士学位论文 第一章 引言包绕的螺旋状结构。在副黏病毒科中 P 与 L 交互序列是保守的(Chard et al., 2008)。PPRV 的复制周期同的麻疹病毒具有相似的复制循环过程，第一步都是通过病毒通过与细胞膜受体连接融合从而将病毒基因组释放入细胞质(Moss and Griffin, 2006)。H 蛋白负责识别宿主细受体分子（唾液酸，淋巴细胞信号激活分子 SLAM/CD150(Adombi et al., 2011b; Seki et3a)，上皮细胞受体分子 Nectin-4(Birch, et al., 2013)）并将病毒与细胞连接。将病毒与细胞连接。H 蛋白与细胞受体连接后可激活 F 蛋白融合活性。
本文编号：3451454
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PPRV粒子的模式结构(Amjadetal.,1996;Banyardetal.,2010)
染 PPRV(Amjad, et al., 1996; Brindha et al., 2001)。1.3 PPR 临床症状和组织病理学PPRV 主要的易感部位是呼吸道和消化道黏膜。口腔炎肺肠炎混合感染，组织病理学损伤在这些部位中表现明显。除了常见的肺炎外，可能发生间质性化脓性肺炎，在嘴唇周围有硬痂，临床症状和病理学损伤类似于牛瘟(Al-Dubaib, 2009)。临床上将 PPRV 给易感宿主造成的危害程度划分为 4 个等级：最急性型、急性型、亚急性型和亚临床型，主要表现为急性型感染(Nawathe and Taylor, 1979)。PPRV 首先在局部淋巴结中增殖并导致病毒血症，然后感染周围敏感的上皮组织，引起肉眼可见的细胞病变和病理学损伤。PPR 的特征性病变为“斑马线”的出现，主要是由于盲肠，结肠近端和直肠严重阻塞的结果(Taylor et al., 2002)。该病除了造成病毒血症外，在口腔和肠黏膜中的组织中形成多核的合胞体，痊愈的动物会获得较强的免疫力，不存在慢性和恢复期带毒的状态。值得注意的是，PPRV 抗原在山羊和绵羊的中枢神经系统中存在但不产生任何神经症状(Kul et al., 2007)。1.4 PPRV 的基因组结构及蛋白功能
业科学院硕士学位论文 第一章 引言包绕的螺旋状结构。在副黏病毒科中 P 与 L 交互序列是保守的(Chard et al., 2008)。PPRV 的复制周期同的麻疹病毒具有相似的复制循环过程，第一步都是通过病毒通过与细胞膜受体连接融合从而将病毒基因组释放入细胞质(Moss and Griffin, 2006)。H 蛋白负责识别宿主细受体分子（唾液酸，淋巴细胞信号激活分子 SLAM/CD150(Adombi et al., 2011b; Seki et3a)，上皮细胞受体分子 Nectin-4(Birch, et al., 2013)）并将病毒与细胞连接。将病毒与细胞连接。H 蛋白与细胞受体连接后可激活 F 蛋白融合活性。
本文编号：3451454
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