产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体的制备

发布时间：2021-10-24 07:32

　　为了制备产气荚膜梭菌致病性毒力因子α毒素的单克隆抗体,试验采用PCR法获得α毒素基因,克隆入原核表达质粒p ET-30b,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,构建表达α毒素的重组菌BL21/p ET-30b-α;IPTG诱导重组菌表达,并进行SDS-PAGE分析,以纯化的重组α毒素蛋白为免疫原免疫Balb/c小鼠,经筛选、亚类鉴定及特异性试验检测单克隆抗体。结果表明:重组菌表达的α毒素蛋白分子质量约为43 ku;杂交瘤细胞株3C5能够稳定分泌抗α毒素单克隆抗体,单克隆抗体亚型为Ig G2a型,能够特异识别产气荚膜梭菌天然α毒素蛋白。说明制备的单克隆抗体具有良好的反应原性。 

【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2017,(03)北大核心

【文章页数】：3 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 菌株、细胞和质粒
    1.2 主要试剂
    1.3 重组菌BL21/p ET-30b-α的构建
    1.4 α毒素蛋白的诱导表达
    1.5 α毒素蛋白的纯化与复性
    1.6 单克隆抗体的制备
    1.7 单克隆抗体识别天然蛋白的特异性检测
    1.8 单克隆抗体亚型与效价的测定
2 结果与分析
    2.1 重组菌BL21/p ET-30b-α的构建
    2.2 α毒素蛋白的诱导表达
    2.3 杂交瘤细胞的建立
    2.4 单克隆抗体识别天然蛋白的特异性检测
    2.5 抗体效价的测定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]产气荚膜梭菌α毒素在干酪乳杆菌中的诱导表达及其小鼠口服免疫力[J]. 李晓静,夏春丽,李一经.  微生物学报. 2009(08)
[2]幽门螺杆菌vacA基因重组表达的包涵体复性及ELISA方法的建立[J]. 党双锁,王宏仓,贾晓黎,袁利超,王宝峰,张欣,张正国,程延安.  世界华人消化杂志. 2005(20)
[3]抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体基因的克隆和表达[J]. 赵宝华,许崇波.  生物工程学报. 2001(05)



本文编号：3454859