lncRNA THOR敲除小鼠和家兔模型的构建及其对细胞增殖影响的研究
发布时间：2021-10-24 23:15
lncRNA THOR被证实在多种癌症及哺乳动物睾丸中表达,又被称为癌/睾丸（Cancer/testis）lncRNA。THOR基因位于染色体2q14.2处,有三个外显子,总长度为3.465 kb。研究表明,THOR基因在雄性生殖中有重要的作用,但目前尚缺少哺乳动物模型支持该理论研究。关于THOR在雄性生育力中的作用机制需要进一步阐明。此外,已有研究表明lncRNA上的m6A甲基化修饰在肿瘤进程中发挥重要作用,并且THOR的互作蛋白IGF2BP1是m6A识别蛋白IGF2BPs中的一员。但THOR的致癌作用是否与m6A相关尚无研究报道。因此,本论文通过构建lncRNA THOR基因敲除小鼠、家兔模型,探讨其对哺乳动物生殖能力影响的分子机理。并通过构建lncRNA THOR和METTL3基因敲除的H1299细胞系,阐述m6A甲基化修饰对lncRNA THOR促进细胞增殖的调节作用。首先,利用CRISPR/Cas9技术,成功构建THOR基因敲除小鼠和家兔模型。经PCR扩增、Sanger测序、qRT-PCR结果显示,THOR基因敲除小鼠和家兔模型均为全长缺失个体。同时Sanger测序及T7EI...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
CRISPR/Cas系统的简史[2]
第一篇综述第1章CRISPR/Cas系统所介导的基因编辑技术的研究进展5Ⅲ的作用下加工成成熟的CRISPRRNA(crRNA)，每个都包含间隔子序列和侧翼重复的部分。在切割(或者效应)区域中参与靶标识别和核酸切割，在此过程中Cas蛋白和成熟的crRNA核糖核蛋白复合物(Ribonucleoproteincomplex，RNP)该复合物通过crRNA和靶核酸的碱基配对识别并切割入侵的外源DNA(或RNA)。图1.2CRISPR/Cas系统的适应性免疫系统[3]Figure1.2OverviewofadaptiveimmunitybyCRISPR/Cassystems[3]1.3CRISPR/Cas系统的组成和分类随着研究的深入，近年来越来越多的CRISPR/Cas系统和Cas蛋白被发现，根据针对CRISPR/Cas类型和亚型的特征基因鉴定，基因库和基因组基因座组织
吉林大学博士学位论文6的比较，以及基于序列相似性的聚类和对CRISPR/Cas系统不同亚型中保守的基因的系统发育分析等方法对CRISPR/Cas系统进行分类。因此，得到了两大类CRISPR/Cas系统(Class1和Class2)(图1.3)[1]。图1.31类和2类CRISPR/Cas基因座的通用结构[1]Figure1.3ThetwoclassesofCRISPR/Cassystems[1]1.3.1Class1-CRISPR/Cas系统在1类CRISPR/Cas系统中，主要包括Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型CRISPR/Cas系统(图1.4)[1]。1.3.1.1Ⅰ型Ⅰ型CRISPR/Cas系统中，采用的是称为CRISPR相关复合物的多亚基核糖核蛋白复合物进行抗病毒防御(级联式)，以进行目标DNA识别和切割[4]，根据其效应复合体的主要成分区别，将其分为ⅠA到E和ⅠF1到3以及ⅠG共十种亚型，其中ⅠA亚型的效应复合体主要由cas11(csa5)、cas7、cas5和cas8a1组成；ⅠB亚型的效应复合体主要由cas8b1、cas7和cas5；ⅠC亚型的效应复合体主要由cas5、cas8c和cas7；ⅠG亚型的效应复合体主要由cas8u2、cas7和GSU0054(cas5和cas6)；ⅠD亚型的效应复合体主要由cas3’’-cas10d、cas7(cas2)、cas5和cas6；ⅠE亚型的效应复合体主要由cas8e(cas1)、cas11(cse2)、cas7、cas5和cas6；ⅠF1亚型的效应复合体主要由cas8f1(csy1)、cas5f1(csy2)、cas7f1(csy3)和cas6f；ⅠF2亚型的效应复合体主要由cas7f2(PBPRB1993)、cas5f2(PBPRB1992)和cas6f；ⅠF3亚型的效应复合体主要由cas8f3/cas5f3、cas7f3和cas6f。1.3.1.2Ⅲ型Ⅲ型CRISPR/Cas系统中，较为不同的是环状寡核苷酸(cOA)信号通路协同其效应复合体和CARF(CRISPR-associatedRossmannfold)域核糖核酸酶(Csm6/Csx1家族)来发挥作用[5-9]，根据其效应复合体的主要成分区别，将其分为ⅢA、D、E、F、C和B三种亚型，其中ⅢA亚型的效应复合体主要由cas10、
【参考文献】：
期刊论文
[1]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文编号：3456178
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
CRISPR/Cas系统的简史[2]
第一篇综述第1章CRISPR/Cas系统所介导的基因编辑技术的研究进展5Ⅲ的作用下加工成成熟的CRISPRRNA(crRNA)，每个都包含间隔子序列和侧翼重复的部分。在切割(或者效应)区域中参与靶标识别和核酸切割，在此过程中Cas蛋白和成熟的crRNA核糖核蛋白复合物(Ribonucleoproteincomplex，RNP)该复合物通过crRNA和靶核酸的碱基配对识别并切割入侵的外源DNA(或RNA)。图1.2CRISPR/Cas系统的适应性免疫系统[3]Figure1.2OverviewofadaptiveimmunitybyCRISPR/Cassystems[3]1.3CRISPR/Cas系统的组成和分类随着研究的深入，近年来越来越多的CRISPR/Cas系统和Cas蛋白被发现，根据针对CRISPR/Cas类型和亚型的特征基因鉴定，基因库和基因组基因座组织
吉林大学博士学位论文6的比较，以及基于序列相似性的聚类和对CRISPR/Cas系统不同亚型中保守的基因的系统发育分析等方法对CRISPR/Cas系统进行分类。因此，得到了两大类CRISPR/Cas系统(Class1和Class2)(图1.3)[1]。图1.31类和2类CRISPR/Cas基因座的通用结构[1]Figure1.3ThetwoclassesofCRISPR/Cassystems[1]1.3.1Class1-CRISPR/Cas系统在1类CRISPR/Cas系统中，主要包括Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型CRISPR/Cas系统(图1.4)[1]。1.3.1.1Ⅰ型Ⅰ型CRISPR/Cas系统中，采用的是称为CRISPR相关复合物的多亚基核糖核蛋白复合物进行抗病毒防御(级联式)，以进行目标DNA识别和切割[4]，根据其效应复合体的主要成分区别，将其分为ⅠA到E和ⅠF1到3以及ⅠG共十种亚型，其中ⅠA亚型的效应复合体主要由cas11(csa5)、cas7、cas5和cas8a1组成；ⅠB亚型的效应复合体主要由cas8b1、cas7和cas5；ⅠC亚型的效应复合体主要由cas5、cas8c和cas7；ⅠG亚型的效应复合体主要由cas8u2、cas7和GSU0054(cas5和cas6)；ⅠD亚型的效应复合体主要由cas3’’-cas10d、cas7(cas2)、cas5和cas6；ⅠE亚型的效应复合体主要由cas8e(cas1)、cas11(cse2)、cas7、cas5和cas6；ⅠF1亚型的效应复合体主要由cas8f1(csy1)、cas5f1(csy2)、cas7f1(csy3)和cas6f；ⅠF2亚型的效应复合体主要由cas7f2(PBPRB1993)、cas5f2(PBPRB1992)和cas6f；ⅠF3亚型的效应复合体主要由cas8f3/cas5f3、cas7f3和cas6f。1.3.1.2Ⅲ型Ⅲ型CRISPR/Cas系统中，较为不同的是环状寡核苷酸(cOA)信号通路协同其效应复合体和CARF(CRISPR-associatedRossmannfold)域核糖核酸酶(Csm6/Csx1家族)来发挥作用[5-9]，根据其效应复合体的主要成分区别，将其分为ⅢA、D、E、F、C和B三种亚型，其中ⅢA亚型的效应复合体主要由cas10、
【参考文献】：
期刊论文
[1]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文编号：3456178
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