水牛精子获能前后蛋白质组学初步研究
发布时间：2021-10-27 11:19
水牛（Bubalus bubalis）是我国南方亚热带地区最重要的乳肉兼用型大家畜,是一种优良的种质资源。但是,水牛的繁殖效率较低,其中精子受精过程障碍是造成低受精率的重要因素。与体细胞不同,精子是高度特异分化的细胞,成熟精子的基因转录和翻译过程几乎处于沉默状态。精子获能是成功受精的先决条件,主要依赖于蛋白质的转运和翻译后修饰来实现。蛋白质组学已被广泛应用于哺乳动物精子发育和成熟研究,已发现了一批与精子获能有关的特殊蛋白质和酪氨酸磷酸化蛋白质,但在水牛生殖生物学研究领域尚未见报道。为了更好的了解水牛精子获能的潜在机制,本研究通过蛋白质组学技术探索水牛精子蛋白质在获能前后的动态变化,从蛋白质表达和翻译后修饰的角度分析影响精子获能的因素,为水牛生殖机理研究提供新的视角。本文的主要研究结果如下所示:一、水牛精子获能前后的定量蛋白质组学分析。使用TMT（Tandem Mass Tag）标记结合液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）的策略对精子获能前后的蛋白质表达进行定量分析。结果显示,共鉴定1441个蛋白质,以未获能精子组作为对照组,获能精子组作为实验组,共得到差异表达蛋白质93个（差异倍数&g...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１精子生成的调控
学位论文水牛精子获能前后蛋白质组的测定及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ??证实验数据的准确性，不同样品之间应使用相同质量的蛋白质进质浓度进行测定（ＢＣＡ法）。首先按照操作说明制作蛋白质标准曲，注意最多只能去除两个，不然说明测定不准确，需重新测定。光度值，在标准曲线上找到对应的值即为对应的蛋白质浓度值。数Ｒ２＝０．９９６９，说明标准曲线的线性良好，符合实验要求。??照组样品与实验组样品（各２０昭）进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，如图１－样品条带清晰均一，分离效果较好，可进行下一步实验。随后，观察酶解效果，将酶解后的样品进行同样的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，卜３中Ｃ、Ｄ所示，两组样品均只在底部检测到有条带存在，说明效果良好，可继续进行后续实验。??ｙ－０．７５５８ｘ－０．１５２??０■?６???＝?０．９９６９??
此需对蛋白质浓度进行测定（ＢＣＡ法）。首先按照操作说明制作蛋白质标准曲线，去除??偏差较大的点，注意最多只能去除两个，不然说明测定不准确，需重新测定。然后测定??待测样品的吸光度值，在标准曲线上找到对应的值即为对应的蛋白质浓度值。如图１－２??所示，回归系数Ｒ２＝０．９９６９，说明标准曲线的线性良好，符合实验要求。??分别取对照组样品与实验组样品（各２０昭）进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，如图１－３中Ａ、??Ｂ所示，两组样品条带清晰均一，分离效果较好，可进行下一步实验。随后，蛋白质被??酶解后，为了观察酶解效果，将酶解后的样品进行同样的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，上样量为??２０明，如图卜３中Ｃ、Ｄ所示，两组样品均只在底部检测到有条带存在，说明蛋白质酶??解完全，酶解效果良好，可继续进行后续实验。??ｙ－０．７５５８ｘ－０．１５２??０■?６???＝?０．９９６９??Ｏｌｏ?????ａ?４??－／＾―???１?一??竺奴３?？浓嗖??崁ａ２????——线性（浓度）??＞?０．２?ａ?４?ａ?６?ａｓ?ｉ??七１?＾???图１－２蛋白质标准曲线??Ｆｉｇｕｒｅ?１?－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ??Ｍ?Ａ?Ｂ?Ｃ?Ｄ??２５０ＫＤ－＞｜ｐｓａ｜?ＷＢＢ??７５??５０?）?■■??２５＾??２〇＋?漏??Ｘ５?－＞??ｉｏ?＋?＿｜＿Ｋ冒??图１－３获能前与获能后精子蛋白质和酶解肽段的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图（Ｍ：蛋白ｍａｒｋｅｒ，?Ａ：获能??精子蛋白质
【参考文献】：
期刊论文
[1]可溶性腺苷酸环化酶介导的信号通路在精子获能中的研究进展[J]. 游爱平,王芬,刘岑,伍克佳. 中国妇幼保健. 2017(04)
[2]精子发生过程中组蛋白甲基化和乙酰化[J]. 葛少钦,李建忠,张晓静. 遗传. 2011(09)
[3]天冬氨酸作为非特异性吸附抑制剂在二氧化钛选择性富集磷酸肽中的应用[J]. 迟明,毕炜,卢庄,宋丽娜,贾伟,张养军,钱小红,蔡耘. 色谱. 2010(02)
博士论文
[1]上海市典型环境介质中精神药物污染特性及吸附机理研究[D]. 向甲甲.上海大学 2018
[2]水牛生殖细胞蛋白质组表达谱构建和定量差异分析[D]. 付强.广西大学 2016
硕士论文
[1]梅山猪和杜洛克猪精子活力和蛋白磷酸化比较研究[D]. 胡启蒙.上海交通大学 2014
[2]中草药饲料添加剂对公兔生殖机能的影响[D]. 丁海荣.西北农林科技大学 2006
[3]羊驼人工采精技术的建立及精液品质评价[D]. 陈明华.山西农业大学 2005
本文编号：3461494
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１精子生成的调控
学位论文水牛精子获能前后蛋白质组的测定及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ??证实验数据的准确性，不同样品之间应使用相同质量的蛋白质进质浓度进行测定（ＢＣＡ法）。首先按照操作说明制作蛋白质标准曲，注意最多只能去除两个，不然说明测定不准确，需重新测定。光度值，在标准曲线上找到对应的值即为对应的蛋白质浓度值。数Ｒ２＝０．９９６９，说明标准曲线的线性良好，符合实验要求。??照组样品与实验组样品（各２０昭）进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，如图１－样品条带清晰均一，分离效果较好，可进行下一步实验。随后，观察酶解效果，将酶解后的样品进行同样的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，卜３中Ｃ、Ｄ所示，两组样品均只在底部检测到有条带存在，说明效果良好，可继续进行后续实验。??ｙ－０．７５５８ｘ－０．１５２??０■?６???＝?０．９９６９??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]可溶性腺苷酸环化酶介导的信号通路在精子获能中的研究进展[J]. 游爱平,王芬,刘岑,伍克佳. 中国妇幼保健. 2017(04)
[2]精子发生过程中组蛋白甲基化和乙酰化[J]. 葛少钦,李建忠,张晓静. 遗传. 2011(09)
[3]天冬氨酸作为非特异性吸附抑制剂在二氧化钛选择性富集磷酸肽中的应用[J]. 迟明,毕炜,卢庄,宋丽娜,贾伟,张养军,钱小红,蔡耘. 色谱. 2010(02)
博士论文
[1]上海市典型环境介质中精神药物污染特性及吸附机理研究[D]. 向甲甲.上海大学 2018
[2]水牛生殖细胞蛋白质组表达谱构建和定量差异分析[D]. 付强.广西大学 2016
硕士论文
[1]梅山猪和杜洛克猪精子活力和蛋白磷酸化比较研究[D]. 胡启蒙.上海交通大学 2014
[2]中草药饲料添加剂对公兔生殖机能的影响[D]. 丁海荣.西北农林科技大学 2006
[3]羊驼人工采精技术的建立及精液品质评价[D]. 陈明华.山西农业大学 2005
本文编号：3461494
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