棒状体蛋白18介导弓形虫和新孢子虫毒力差异的分子机制研究

发布时间：2021-10-30 11:02

　　弓形虫（Toxoplasma gondii, T. gondii）和新孢子虫（Neospora caninium, N. caninum）都是专性细胞内寄生原虫,同属顶复亚门,二者在形态学特征和生物学特性上有许多相似之处,但是它们对小鼠的急性毒力却存在显著差异。许多研究已经表明弓形虫棒状体蛋白18（T. gondii rhoptry protein18, TgROP18）是其最重要的毒力因子,介导了弓形虫Ⅰ型强毒株与Ⅲ型弱毒株的毒力差异。本研究通过生物信息学分析发现新孢子虫棒状体蛋白18（N. caninum rhoptry protein18, NcROP18）的基因序列中插入了多个终止密码子,不能表达相应的功能蛋白,是一个假基因。因此,我们推测弓形虫与新孢子虫ROP18的差异可能是导致它们急性毒力差异的重要因素。基于上述原因,我们开展了如下研究。首先将弓形虫Ⅰ型虫株RH株的TgROP18定向克隆至pDMG表达载体,构建了以绿色荧光蛋白（GFP）为报告基因、乙胺嘧啶抗性基因CDHFR-TS)为筛选标记的pDMG-TgROP18-GFP转染质粒。通过电转化方法将质粒转入新孢子虫Nc1株... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 弓形虫转基因学研究进展
    1.2 新孢子虫转基因学研究进展
    1.3 弓形虫毒力因子研究进展
    1.4 弓形虫和新孢子虫致病性差异的思考
第二章 表达TGROP18的转基因新孢子虫的构建
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 TgROP18与NcROP18基因序列比对分析
        2.3.2 重组质粒pDMG-TgROP18-GFP的构建
        2.3.3 转基因新孢子虫的构建及筛选
        2.3.4 转基因新孢子虫的鉴定
        2.3.5 TgROP18在转基因新孢子虫的定位分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 表达TGROP18的转基因新孢子虫的表型研究
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 转基因新孢子虫在细胞中的生长周期缩短
        3.3.2 转基因新孢子虫的表型发生改变
        3.3.3 转基因新孢子虫的运动能力未发生改变
        3.3.4 转基因新孢子虫的滑行运动能力未发生改变
        3.3.5 转基因新孢子虫入侵细胞的能力未发生改变
        3.3.6 转基因新孢子虫在细胞内的增殖能力增强
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 转基因表达TGROP18对新孢子虫毒力的影响
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 转基因新孢子虫对小鼠的毒力显著增强
        4.3.2 转基因表达的TgROP18阻止IRGs向转基因新孢子虫的PVM募集
        4.3.3 转基因新孢子虫可以磷酸化IRGs
        4.3.4 转基因新孢子虫中NcROP5可能发挥调控TgROP18的作用
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 结论与创新点
    5.1 结论
    5.2 创新点
参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3466611