ASFV P72抗体的制备及在干酪乳杆菌中的表达

发布时间：2021-11-01 00:40

　　非洲猪瘟是世界动物卫生组织（Office International desépizooties,OIE）规定的法定报告动物疫病,也是最近两年在我国传播范围较广的一类动物疫病。其病原体为非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）,是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员,也是唯一通过节肢动物进行传播的DNA病毒。非洲猪瘟病毒天然宿主为野猪和蜱虫,主要感染家猪、野猪和软蜱虫,家猪感染后多表现为内脏剧烈出血、高热、呼吸障碍等临床症状,病死率可达100%。由于ASFV存活时间久、传播途径广泛且无有效疫苗加以防控,目前只能通过对发病猪只和染毒猪只大量捕杀、就地深埋的方式对疫情加以控制,对全球养猪产业造成严重的经济损失。因此,开发效果佳、安全性高的非洲猪瘟疫苗已经迫在眉睫。干酪乳杆菌（Lactobcillus casei）作为人和动物肠道、呼吸道和泌尿生殖道的益生菌群之一,在食品和发酵领域中的长期应用早已被证明其安全性。干酪乳杆菌能够非特异性地提高人和动物的免疫力,尤其能够促进粘膜免疫。干酪乳杆菌也可以作为外源蛋白的表达载体,诱导机体产生特异性的粘膜免疫和系统性... 

【文章来源】：山东师范大学山东省

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【学位级别】：硕士

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pET-28a-P72重组质粒消化鉴定图

山东师范大学硕士学位论文31肠杆菌原核表达载体pET-28a中，形成重组质粒pET-28a-P72、pET-28a-sP72。如图2-1所示，经过限制性核酸内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ消化鉴定，电泳后显示质粒pET-28a-P72有空载约5369bp、目的片段约1941bp；如图2-2所示，质粒pET-28a-sP72有空载约5369bp、目的片段约627bp。消化鉴定结束后将质粒送至青岛擎科生物技术有限公司进行测序鉴定。应用NCBI及DNAMAN进行序列比对证明重组质粒构建成功。3.1.1pET-28a-P72、pET-28a-sP72原核表达载体消化鉴定图2-1：pET-28a-P72重组质粒消化鉴定图M：DL-10000Marker，1-2：pET-28a-P72重组质粒，3-4：pET-28a-P72重组质粒EcoRⅠ、XhoⅠ消化鉴定图2-2：pET-28a-sP72重组质粒消化鉴定图M：DL-10000Marker，1：pET-28a-sP72重组质粒，2：pET-28a-sP72重组质粒EcoRⅠ、XhoⅠ消化鉴定

山东师范大学硕士学位论文323.1.2pET-28a-P72、pET-28a-sP72原核表达载体测序鉴定图2-3：pET-28a-P72测序鉴定图2-4：pET-28a-sP72测序鉴定3.2SDS-PAGE鉴定蛋白表达最佳条件3.2.1P72蛋白表达将重组原核表达质粒pET-28a-P72转化至大肠杆菌BL21感受态中，利用IPTG诱导P72蛋白的表达，经SDS-PAGE凝胶电泳的分离后可观察到大肠杆菌中各蛋白表达情况。如图2-5所示，在合理选用不同IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等条件下进行培养，P72蛋白均未见明显表达。进一步对目标条带处进行WesternBlotting鉴定，结果如2-6所示，在72KD附近无特异性条带。由此可证实P72蛋白在大肠杆菌中确实未表达。


本文编号：3469182