肠出血性大肠杆菌O157：H7胶体金检测试纸条的研制及其应用
发布时间：2021-11-01 14:52
肠出血性大肠杆菌（EHEC）是腹泻性大肠杆菌中重要的一类,属于人畜共患病原菌。主要引起人的出血性肠炎。其中0157：H7是它的一个重要的血清型,在全世界众多散发或暴发流行的腹泻病例中经常涉及到。EHEC O157:H7主要是通过污染食物被人类食用后引发感染,属于食源性致病菌。并且少量的活菌就能导致EHEC O157:H7的感染,使得疾病发生的危险高于其他病原菌。因此,加强EHEC O157:H7的检测极为重要。而传统的细菌分离鉴定方法耗时长,操作繁琐。其他的一些实验室检测方法对仪器设备及操作人员都有一定的要求,不适用于基层检测及大批量样品的筛查。本研究利用两株特异性的单克隆抗体,结合胶体金免疫层析技术,以建立一种灵敏、特异、快速、简便的EHEC O157:H7检测方法。1. EHEC O157:H7单克隆抗体的筛选利用相加ELISA试验对实验室制备的8株针对EHEC O157:H7菌体抗原的单克隆抗体进行筛选,挑选出抗原识别表位影响最小的两株单抗1H3、6F4。其中1H3为IgG,6F4为IgM。对6F4进行辣根过氧化物酶标记,对1H3和HRP-6F4进行竞争ELISA试验,证明两株单...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略词
1. 前言
1.1 食源性疾病与食源性致病菌
1.2 肠出血性大肠杆菌O157：H7(EHEC O157：H7)概况
1.2.1 EHEC O157：H7病原学特征
1.2.2 EHEC O157：H7主要致病机理及毒力因子
1.2.3 EHEC O157：H7的流行病学特点
1.2.4 EHEC O157：H7临床特征及危害
1.2.5 EHEC O157：H7的检测方法的研究进展
1.3 胶体金免疫层析技术
1.4 研究目的与意义
2. 材料及方法
2.1 材料
2.1.1 菌株及抗体
2.1.2 主要器材
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要溶液配制
2.2 方法
2.2.1 EHEC O157：H7的培养及处理
2.2.2 McAb识别表位鉴定
2.2.3 杂交瘤细胞复苏与McAb制备
2.2.4 EHEC O157：H7胶体金检测试纸条制备
2.2.5 胶体金试纸条性能评价
2.2.6 人工模拟污染样品检测
2.2.7 市场猪肉样品检测
3. 结果与分析
3.1 McAb识别表位鉴定
3.1.1 相加ELISA试验
3.1.2 竞争ELISA试验
3.2 杂交瘤细胞复苏与McAb制备纯化
3.2.1 杂交瘤细胞复苏与培养
3.2.2 腹水纯化
3.3 EHEC O157：H7胶体金检测试纸条制备
3.3.1 胶体金制备
3.3.2 胶体金最适抗体标记量测定
3.3.3 胶体金最佳标记pH值测定
3.3.4 胶体金试纸条组装
3.3.5 封闭液的选择
3.3.6 样品稀释液的选择
3.3.7 胶体金试纸条制备条件的确定
3.3.8 胶体金试纸条特异性
3.3.9 胶体金试纸条灵敏度
3.3.10 胶体金试纸条重复性
3.4 人工模拟污染样品检测
3.5 市场猪肉样品检测
4. 讨论
4.1 关于以两株单抗制备胶体金试纸条的分析
4.2 关于单抗识别位点分析
4.3 关于IgM型单抗的纯化分析
4.4 关于胶体金试纸条性能影响因素分析
4.5 关于EHEC O157：H7检测样品的前处理分析
5. 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]饲料中硝基呋喃类药物免疫胶体金检测试纸条的研制[J]. 何方洋,冯才伟,孙震,赵正苗,何丽霞. 饲料工业. 2012(23)
[2]2001—2010年中国食源性疾病暴发情况分析[J]. 徐君飞,张居作. 中国农学通报. 2012(27)
[3]MPCR-DHPLC检测大肠杆菌O157研究[J]. 许龙岩,刘静宇,袁慕云,陈碧玲,阳静,焦红. 中国卫生检验杂志. 2012(05)
[4]同时检测两种真菌毒素的胶体金试纸条的研制[J]. 吴文晔,徐炜,李艳,舒文祥,周坚. 食品工程. 2011(04)
[5]大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[J]. 刘红亮,李克生,陈学忠,杜惠芬,连晓雯,鲁学萍,袁明. 中国兽医科学. 2011(12)
[6]双抗夹心ELISA检测肠出血性大肠杆菌O157方法的建立[J]. 吴大成,孙洋,袁洁,康桦华,郭学军,祝令伟,陈志虹,向蓉,冯书章. 中国兽医学报. 2011(12)
[7]水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用[J]. 孟盟,曹池,陈汉忠,刘明如,王华俊,奉彬,陈国宝. 畜牧兽医学报. 2011(07)
[8]大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测方法的建立[J]. 王建广,雷质文,石琰璟,付静芸,房保海,祝素珍,姜英辉,刘云国,张健,杨大伟. 安徽农业大学学报. 2011(02)
[9]几种食源性致病菌及其监控[J]. 兰述,徐红华,李铁晶,许岩. 东北农业大学学报. 2010(11)
[10]免疫PCR技术检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7[J]. 赵春燕,曹娜娜,王海河,梁松鹤. 临床检验杂志. 2010(05)
博士论文
[1]肠出血性大肠杆菌O157：H7重要致病因子的晶体结构、功能和应用研究[D]. 顾江.第三军医大学 2010
硕士论文
[1]EHEC O157：H7的IMS-PCR检测方法的研究[D]. 王倩.华中农业大学 2012
[2]鸡毒霉形体代谢抑制性单克隆抗体的研制及初步应用[D]. 杜红霞.华中农业大学 2007
本文编号：3470305
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略词
1. 前言
1.1 食源性疾病与食源性致病菌
1.2 肠出血性大肠杆菌O157：H7(EHEC O157：H7)概况
1.2.1 EHEC O157：H7病原学特征
1.2.2 EHEC O157：H7主要致病机理及毒力因子
1.2.3 EHEC O157：H7的流行病学特点
1.2.4 EHEC O157：H7临床特征及危害
1.2.5 EHEC O157：H7的检测方法的研究进展
1.3 胶体金免疫层析技术
1.4 研究目的与意义
2. 材料及方法
2.1 材料
2.1.1 菌株及抗体
2.1.2 主要器材
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要溶液配制
2.2 方法
2.2.1 EHEC O157：H7的培养及处理
2.2.2 McAb识别表位鉴定
2.2.3 杂交瘤细胞复苏与McAb制备
2.2.4 EHEC O157：H7胶体金检测试纸条制备
2.2.5 胶体金试纸条性能评价
2.2.6 人工模拟污染样品检测
2.2.7 市场猪肉样品检测
3. 结果与分析
3.1 McAb识别表位鉴定
3.1.1 相加ELISA试验
3.1.2 竞争ELISA试验
3.2 杂交瘤细胞复苏与McAb制备纯化
3.2.1 杂交瘤细胞复苏与培养
3.2.2 腹水纯化
3.3 EHEC O157：H7胶体金检测试纸条制备
3.3.1 胶体金制备
3.3.2 胶体金最适抗体标记量测定
3.3.3 胶体金最佳标记pH值测定
3.3.4 胶体金试纸条组装
3.3.5 封闭液的选择
3.3.6 样品稀释液的选择
3.3.7 胶体金试纸条制备条件的确定
3.3.8 胶体金试纸条特异性
3.3.9 胶体金试纸条灵敏度
3.3.10 胶体金试纸条重复性
3.4 人工模拟污染样品检测
3.5 市场猪肉样品检测
4. 讨论
4.1 关于以两株单抗制备胶体金试纸条的分析
4.2 关于单抗识别位点分析
4.3 关于IgM型单抗的纯化分析
4.4 关于胶体金试纸条性能影响因素分析
4.5 关于EHEC O157：H7检测样品的前处理分析
5. 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]饲料中硝基呋喃类药物免疫胶体金检测试纸条的研制[J]. 何方洋,冯才伟,孙震,赵正苗,何丽霞. 饲料工业. 2012(23)
[2]2001—2010年中国食源性疾病暴发情况分析[J]. 徐君飞,张居作. 中国农学通报. 2012(27)
[3]MPCR-DHPLC检测大肠杆菌O157研究[J]. 许龙岩,刘静宇,袁慕云,陈碧玲,阳静,焦红. 中国卫生检验杂志. 2012(05)
[4]同时检测两种真菌毒素的胶体金试纸条的研制[J]. 吴文晔,徐炜,李艳,舒文祥,周坚. 食品工程. 2011(04)
[5]大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[J]. 刘红亮,李克生,陈学忠,杜惠芬,连晓雯,鲁学萍,袁明. 中国兽医科学. 2011(12)
[6]双抗夹心ELISA检测肠出血性大肠杆菌O157方法的建立[J]. 吴大成,孙洋,袁洁,康桦华,郭学军,祝令伟,陈志虹,向蓉,冯书章. 中国兽医学报. 2011(12)
[7]水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用[J]. 孟盟,曹池,陈汉忠,刘明如,王华俊,奉彬,陈国宝. 畜牧兽医学报. 2011(07)
[8]大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测方法的建立[J]. 王建广,雷质文,石琰璟,付静芸,房保海,祝素珍,姜英辉,刘云国,张健,杨大伟. 安徽农业大学学报. 2011(02)
[9]几种食源性致病菌及其监控[J]. 兰述,徐红华,李铁晶,许岩. 东北农业大学学报. 2010(11)
[10]免疫PCR技术检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7[J]. 赵春燕,曹娜娜,王海河,梁松鹤. 临床检验杂志. 2010(05)
博士论文
[1]肠出血性大肠杆菌O157：H7重要致病因子的晶体结构、功能和应用研究[D]. 顾江.第三军医大学 2010
硕士论文
[1]EHEC O157：H7的IMS-PCR检测方法的研究[D]. 王倩.华中农业大学 2012
[2]鸡毒霉形体代谢抑制性单克隆抗体的研制及初步应用[D]. 杜红霞.华中农业大学 2007
本文编号：3470305
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3470305.html
