稳定表达Venus基因的重组猪瘟病毒的构建

发布时间：2021-11-02 07:01

　　为了利用CRISPR/Cas9技术高通量筛选介导猪瘟病毒入侵的功能性受体,试验首先用融合PCR技术,将Venus基因融合至N^pro蛋白的第13位与14位氨基酸之间,获得全长感染性克隆pCSFV-Venus;之后将pCSFV-Venus转染至SK6细胞拯救重组猪瘟病毒（rCSFV-Venus）,并将拯救的病毒感染猪肾细胞（PK-15细胞）进行连续传代观察其稳定性;最后将rCSFV-Venus和表达EGFP的重组病毒rCSFV-EGFP以相同剂量感染PK-15细胞,通过流式细胞仪分析荧光强度及感染效率。结果表明:rCSFV-Venus全长感染性克隆构建成功;转染后传至第4代可观察到绿色荧光,表明重组病毒拯救成功;将拯救的病毒连续传代10代,每代感染的PK-15细胞都可观察到绿色荧光,表明重组病毒具有良好的稳定性;流式细胞仪分析结果表明,rCSFV-Venus比rCSFV-EGFP荧光强度强且感染效率高。说明本研究成功拯救了稳定表达Venus基因的rCSFV-Venus,为筛选介导CSFV入侵的功能性受体提供了有力工具。 

【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(20)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

重组病毒的构建策略

pCSFV-Venus感染性克隆的构建结果

将鉴定正确的pCSFV-Venus全长感染性克隆转染至SK6细胞中,转染24 h后即可观察到绿色荧光,而空白对照未观察到荧光(见158页彩图3)。之后进行3次细胞传代,至第4代仍然可观察到绿色荧光。用猪瘟抗原试剂盒检测第4～6代病毒Erns蛋白的表达情况(见图4),表明rCSFV-Venus重组病毒拯救成功。3.3 rCSFV-Venus重组病毒的体外生长特性分析


本文编号：3471561