EG基因在大肠杆菌中的表达及BG基因在乳酸菌中的共分泌表达

发布时间：2021-11-05 08:54

　　【目的】为了增强纤维素酶的酶解效率,提高纤维素的利用率,本实验在实验室之前工作的基础上以大肠杆菌质粒为载体成功克隆并表达了EG基因。同时,以乳酸菌质粒为载体共分泌表达了bglA、bglB基因。本实验不但对进一步研究纤维素酶的酶解机制提高纤维素的利用率起到了一定的帮助作用,同时也为新型动物饲料的研究提供了新的思路,在实验室工作的开展中也起到了承上启下的作用。【方法】（1）根据GenBank b.polymyxa的EG基因序列设计引物,从多粘类芽孢杆菌中提取基因组作为模板扩增EG基因,然后将得到的目的片段与pBluescript II KS（+）链接,将连接产物转化至E.coli DH5α,将测序结果正确的EG基因酶切后连接到pET-28a质粒上,并转入E.coli BL21,最后将双酶切验证合适的工程菌经IPTG诱导使其表达出蛋白,用镍柱纯化蛋白后通过DNS法检测蛋白活性。（2）分别根据GenBank中L.lactis MG1363 usp45基因序列设计信号肽和b.polymyxa的BG基因bglA、bglB序列设计A、B的上游引物以及下游引物。然后以信号肽的上游为上游引物,分别以A、... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
缩略词中英文对照表
第一章 绪论
    1、纤维素的概述
    2、纤维素的结构
    3、研究背景
        3.1 国内外纤维素研究利用对比
        3.2 纤维素的开发利用现状
    4、纤维素酶的概述
        4.1 纤维素酶的来源及结构
        4.2 纤维素酶的作用机理
        4.3 纤维素酶活性的影响因素
        4.4 纤维素酶的应用
        4.5 纤维素酶的发展趋势
    5、研究内容与方法
        5.1 EG基因在大肠杆菌中的表达
        5.2 多粘类芽孢杆菌bglA、bglB基因在乳酸菌中的共分泌表达
    6、研究目的与意义
第二章 EG基因在大肠杆菌中的表达
    1、材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2、实验结果
        2.1 EG克隆与表达载体的构建
        2.2 EG诱导表达及SDS-PAGE电泳
        2.3 DNS法检测蛋白活性
    3、分析讨论
第三章 多粘类芽孢杆菌bglA、bglB基因在乳酸菌中的共分泌表达
    1、材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2、实验结果
        2.1 bglA、bglB克隆与表达载体的构建
        2.2 重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE电泳
        2.3 刚果红染色
        2.4 DNS法测定重组菌株酶活
    3、分析讨论
致谢
参考文献
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导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]玉米秸秆酶水解过程中的酶复配条件优化[J]. 王奇,王林风,闫德冉,张斐洋,刘天天,吴静波.  生物技术通报. 2016(03)
[2]乳酸菌基因表达载体及其应用研究进展[J]. 崔月倩,王菁蕊,王艳萍.  食品科学. 2015(09)
[3]Synthesis and Crystal Structure of a New Charge-assisted Hydrogen-bonded Host Framework [Co（en）3]2[Zr2（C2O4）7]·2H2O[J]. 韩义德,张婧,刘宁宁,王宇,张霞.  结构化学. 2015(03)
[4]1株产纤维素酶真菌的筛选鉴定及其产酶条件优化[J]. 杨培新,郑锐东,罗集丰,谢桂勉,郑钢勇,方培炜,蔡佳维.  江苏农业学报. 2015(01)
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[7]纤维素酶高产菌的选育及其酶制取的研究进展[J]. 刘春辉,单杨,李高阳.  农产品加工(创新版). 2010(04)
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[9]纤维素降解菌筛选分离与CMC酶提取及其活性研究[J]. 聂麦茜,刘加昌,朱玉玺,李立伟,田永胜.  安徽农业科学. 2008(19)
[10]降解纤维素真菌的分离筛选及其环境适应性初探[J]. 颜霞,秦魏.  中国农学通报. 2008(05)

博士论文
[1]木质纤维素降解菌产糖特性及作用机制[D]. 高灵芳.哈尔滨工业大学 2013
[2]生物质纳米纤维素及其自聚集气凝胶的制备与结构性能研究[D]. 陈文帅.东北林业大学 2013
[3]耐热、高活性杂合内切葡聚糖酶基因的设计、表达及酶学性质研究[D]. 周烈.浙江大学 2010



本文编号：3477486