猪圆环病毒
发布时间：2021-11-05 11:41
猪圆环病毒病、猪乙型脑炎和猪细小病毒病均能引起猪的繁殖障碍，且目前多表现为混合感染或继发感染，给养猪业带来了巨大的经济损失。疫苗免疫接种是防控这三种传染病的主要和有效措施，但市场上仅有商品化单苗。随着规模化养殖的发展，猪场免疫接种工作量的加大，使用单苗进行免疫费时、费力,而且对动物造成很大应激，影响免疫效果。因此，现代规模化养殖生产中，迫切需要能够简化免疫程序，一针多防的联苗。本研究以研制猪圆环病毒病-乙型脑炎-细小病毒病三联灭活疫苗为目标，完成了以下研究工作：一．建立了基于PCV2Cap蛋白的间接ELISA方法。用PCR方法获得截短的猪圆环病毒2型orf2基因，经酶切后克隆至原核表达载体pET28a后，在终浓度为40μM IPTG，30℃下诱导表达3h后，经SDS-PAGE分析，目的基因得到正确表达，大小约为24KDa左右，表达产物以可溶性表达为主；Western bloting检测证实其具有免疫反应活性。以纯化的Cap蛋白为包被抗原，建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法。建立的ELISA方法的最佳反应条件是：抗原最适包被量为2μg/孔，包被时间为37℃包被1h后4℃过夜；血清...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
orf2基因的扩增产物及pET28a-orf2重组质粒的双酶切
图 1-2 重组蛋白的 SDS-PAGE.SDS- PAGE analysis of the recombin40 μmol/L IPTG 诱导的 pET28a-orf2 T28a-orf2 菌体裂解上清;T28a-orf2 菌体裂解沉淀；ker;1: The pET28a-orf2 induced by IPTuced by IPTG of 40 μmol/L;3:The pern blotting 鉴定表达产物按照最优条件进行表达果如图 1-3A 所示。将纯化后的蛋一条特异性条带（如图 1-3B）。免疫反应性。M 155KDaM
图 1-2 重组蛋白的 SDS-PAGEFig 1-2.SDS- PAGE analysis of the recombinant proteinMarker; 1:40 μmol/L IPTG 诱导的 pET28a-orf2 菌体；导的 pET28a-orf2 菌体裂解上清;诱导的 pET28a-orf2 菌体裂解沉淀；ar low Marker;1: The pET28a-orf2 induced by IPTG of 40μmol/L;liquor induced by IPTG of 40 μmol/L;3:The precipition induced by I和 Western blotting 鉴定重组菌的表达产物按照最优条件进行表达后，收集菌体，超化，结果如图 1-3A 所示。将纯化后的蛋白进行 Western blo右处可见一条特异性条带（如图 1-3B）。表明所表达蛋白为 P良好的免疫反应性。KDaKDaM 155KDa40KDaM 1
【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究[J]. 汤德元,王凤,马萍,罗险峰,李春燕,曾智勇,徐健,刘建. 畜牧兽医学报. 2012(08)
[2]我国流行性乙型脑炎研究近况[J]. 蔡宝祥. 畜牧与兽医. 2012(07)
[3]猪细小病毒结构蛋白VP2及其疫苗的研究进展[J]. 焦茂兴,郭春和,黄毓茂. 中国畜牧兽医. 2011(10)
[4]登革-日本脑炎嵌合病毒样颗粒的设计与构建[J]. 胡珍,尚伟龙,张俊磊,朱军民,杨杰,刘佳,方昕,袁文常,程航,胡晓梅,饶贤才. 中国预防医学杂志. 2011(08)
[5]携带猪乙型脑炎DNA疫苗减毒沙门菌的构建及其免疫原性[J]. 李云云,郭万柱,徐志文,韩国全,林华,漆信桥. 中国兽医学报. 2011(05)
[6]荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的研究与应用[J]. 李志娟,王永生,陈陆,杨霞,赵军,王川庆. 扬州大学学报(农业与生命科学版). 2011(01)
[7]猪圆环病毒2型灭活疫苗（SH株）—圆克清[J]. 北方牧业. 2010(23)
[8]猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）的研制与应用[J]. 刘长明,危艳武,陆月华,黄立平,吴洪丽,张朝霞,温士刚,姜凤娟. 畜牧兽医科技信息. 2010(09)
[9]PCV2 ORF2基因在大肠杆菌中的表达及与PCV2灭活抗原免疫效果的比较[J]. 刘宗争,尹逊河,栾文华,苏赛. 江西农业学报. 2010(06)
[10]猪细小病毒分子生物学诊断技术及基因工程疫苗的研究进展[J]. 谢巧,李春华. 畜牧与兽医. 2010(02)
博士论文
[1]猪圆环病毒pVAX1-ORF2-ISS核酸疫苗及与猪细胞因子联合免疫研究[D]. 张建远.四川农业大学 2009
硕士论文
[1]猪伪狂犬病、细小病毒病和乙型脑炎三联灭活疫苗的研制[D]. 何永龙.华中农业大学 2010
[2]PPV-JEV二联灭活苗和PPV-PRV二联灭活苗的研制[D]. 黄刚.华中农业大学 2010
[3]猪细小病毒病、伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征三联灭活疫苗的研制及田间试验[D]. 许家荣.南京农业大学 2003
本文编号：3477732
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
orf2基因的扩增产物及pET28a-orf2重组质粒的双酶切
图 1-2 重组蛋白的 SDS-PAGE.SDS- PAGE analysis of the recombin40 μmol/L IPTG 诱导的 pET28a-orf2 T28a-orf2 菌体裂解上清;T28a-orf2 菌体裂解沉淀；ker;1: The pET28a-orf2 induced by IPTuced by IPTG of 40 μmol/L;3:The pern blotting 鉴定表达产物按照最优条件进行表达果如图 1-3A 所示。将纯化后的蛋一条特异性条带（如图 1-3B）。免疫反应性。M 155KDaM
图 1-2 重组蛋白的 SDS-PAGEFig 1-2.SDS- PAGE analysis of the recombinant proteinMarker; 1:40 μmol/L IPTG 诱导的 pET28a-orf2 菌体；导的 pET28a-orf2 菌体裂解上清;诱导的 pET28a-orf2 菌体裂解沉淀；ar low Marker;1: The pET28a-orf2 induced by IPTG of 40μmol/L;liquor induced by IPTG of 40 μmol/L;3:The precipition induced by I和 Western blotting 鉴定重组菌的表达产物按照最优条件进行表达后，收集菌体，超化，结果如图 1-3A 所示。将纯化后的蛋白进行 Western blo右处可见一条特异性条带（如图 1-3B）。表明所表达蛋白为 P良好的免疫反应性。KDaKDaM 155KDa40KDaM 1
【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究[J]. 汤德元,王凤,马萍,罗险峰,李春燕,曾智勇,徐健,刘建. 畜牧兽医学报. 2012(08)
[2]我国流行性乙型脑炎研究近况[J]. 蔡宝祥. 畜牧与兽医. 2012(07)
[3]猪细小病毒结构蛋白VP2及其疫苗的研究进展[J]. 焦茂兴,郭春和,黄毓茂. 中国畜牧兽医. 2011(10)
[4]登革-日本脑炎嵌合病毒样颗粒的设计与构建[J]. 胡珍,尚伟龙,张俊磊,朱军民,杨杰,刘佳,方昕,袁文常,程航,胡晓梅,饶贤才. 中国预防医学杂志. 2011(08)
[5]携带猪乙型脑炎DNA疫苗减毒沙门菌的构建及其免疫原性[J]. 李云云,郭万柱,徐志文,韩国全,林华,漆信桥. 中国兽医学报. 2011(05)
[6]荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的研究与应用[J]. 李志娟,王永生,陈陆,杨霞,赵军,王川庆. 扬州大学学报(农业与生命科学版). 2011(01)
[7]猪圆环病毒2型灭活疫苗（SH株）—圆克清[J]. 北方牧业. 2010(23)
[8]猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）的研制与应用[J]. 刘长明,危艳武,陆月华,黄立平,吴洪丽,张朝霞,温士刚,姜凤娟. 畜牧兽医科技信息. 2010(09)
[9]PCV2 ORF2基因在大肠杆菌中的表达及与PCV2灭活抗原免疫效果的比较[J]. 刘宗争,尹逊河,栾文华,苏赛. 江西农业学报. 2010(06)
[10]猪细小病毒分子生物学诊断技术及基因工程疫苗的研究进展[J]. 谢巧,李春华. 畜牧与兽医. 2010(02)
博士论文
[1]猪圆环病毒pVAX1-ORF2-ISS核酸疫苗及与猪细胞因子联合免疫研究[D]. 张建远.四川农业大学 2009
硕士论文
[1]猪伪狂犬病、细小病毒病和乙型脑炎三联灭活疫苗的研制[D]. 何永龙.华中农业大学 2010
[2]PPV-JEV二联灭活苗和PPV-PRV二联灭活苗的研制[D]. 黄刚.华中农业大学 2010
[3]猪细小病毒病、伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征三联灭活疫苗的研制及田间试验[D]. 许家荣.南京农业大学 2003
本文编号：3477732
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