羊抗鸡酶标二抗的制备
发布时间：2021-11-05 14:24
酶标二抗是一种伴随着免疫检测诞生的试剂,既拥有作为抗体的高度特异性和敏感性,又拥有可以高效催化酶底物的能力。对比直接进行免疫检测的酶标一抗具有提高效率、降低成本、减少假阳性和信号级联放大的作用。羊抗鸡酶标二抗与同类产品相比具有诸多优势,以鸡作为抗原的免疫宿主拥有更广的抗原测定的范围,将羊抗体作为二抗则拥有很大的市场前景。羊抗鸡酶标二抗的制备有四个关键技术,即鸡卵黄抗体的提纯、羊免疫反应、羊血清（血浆）抗体的提纯以及酶联反应。本研究在综合前人研究工作的基础上,拟建立酶标二抗的制备方法。论文实验结果如下:（1）以多个方法制备鸡卵黄抗体IgY并对各方法进行比较。水稀释-乙醇分级沉淀,氯仿-乙醇分级沉淀,氯仿-DEAE柱层析以及氯仿-硫酸铵二次沉淀法得到的蛋白质纯度分别:54%,55%,80%和91%。水稀释-乙醇分级沉淀法IgY得率为11.99mg每个鸡蛋,氯仿-乙醇分级沉淀法蛋白得率为16.50mg每个鸡蛋,四种方法中IgY得率最高的是氯仿-硫酸铵二次沉淀法,每个鸡蛋中可以提取17.26mg IgY。氯仿-DEAE柱层析法和氯仿-硫酸铵二次沉淀法都可以得到高纯度IgY,但综合效率和成本等因...
【文章来源】：兰州理工大学甘肃省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 酶标抗体
1.1.1 酶标抗体简介
1.1.2 酶标二抗
1.1.3 酶标二抗的应用
1.2 鸡卵黄抗体
1.2.1 鸡卵黄抗体简介
1.2.2 鸡卵黄抗体的提纯
1.2.3 抗体的纯度检测
1.3 羊血清抗体
1.3.1 羊血清抗体简介
1.3.2 羊血清抗体的纯化
1.4 辣根过氧化物酶
1.4.1 辣根过氧化物酶简介
1.4.2 辣根过氧化物酶结构
1.4.3 辣根过氧化物酶标记抗体
1.5 酶标二抗效价的测定
1.6 研究意义
1.7 研究内容
第二章 鸡卵黄抗体的提纯
2.1 实验器材
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验主要仪器
2.1.4 实验主要试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 水稀释-乙醇分级沉淀法提纯IgY
2.2.2 氯仿-乙醇分级沉淀法提纯抗体
2.2.3 二氯甲烷-乙醇分级沉降法提纯抗体
2.2.4 氯仿粗提-DEAE琼脂糖凝胶柱层析法提纯鸡卵黄抗体
2.2.5 氯仿-硫酸铵二次沉淀法提纯鸡卵黄抗体
2.2.6 Bradford法检测IgY样品的蛋白质浓度
2.2.7 SDS-PAGE检测IgY纯度
2.3 实验结果与分析
2.3.1 提纯后的蛋白浓度及产率计算
2.3.2 SDS-PAGE检测IgY纯度
2.3.3 SDS-PAGE检测氯仿粗提-DEAE柱层析法
2.3.4 SDS-PAGE检测氯仿-硫酸铵二次沉淀法结果
第三章 羊免疫反应
3.1 实验器材
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验主要试剂的配制
3.2 实验方法
3.2.1 羊免疫反应抗原制备方法
3.2.2 羊免疫反应方法
3.2.3 SDS-PAGE检测IgY纯度
3.2.4 SDS-PAGE检测羊血浆中的总蛋白
3.3 实验结果及分析
3.3.1 一抗制备结果
3.3.2 羊免疫反应
3.3.3 羊血浆蛋白SDS-PAGE检测
第四章 羊抗体的提纯
4.1 实验器材
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.1.4 实验主要试剂的配制
4.2 实验方法
4.2.1 羊血浆的制备
4.2.2 辛酸-硫酸铵法提取羊血浆中的抗体
4.2.3 SDS-PAGE检测IgG纯度
4.3 实验结果及分析
第五章 HRP标记羊抗鸡二抗及活性检测
5.1 实验材料
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验试剂
5.1.3 实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 实验主要试剂配制
5.2.2 高碘酸钠氧化法标记抗体
5.2.3 Western Blot检测酶标二抗活性
5.2.4 HRP和酶标IgG化学发光检测
5.3 实验结果及讨论
结论
参考文献
致谢
附录A:攻读学位期间所发表的学术论文目录
本文编号：3477969
【文章来源】：兰州理工大学甘肃省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 酶标抗体
1.1.1 酶标抗体简介
1.1.2 酶标二抗
1.1.3 酶标二抗的应用
1.2 鸡卵黄抗体
1.2.1 鸡卵黄抗体简介
1.2.2 鸡卵黄抗体的提纯
1.2.3 抗体的纯度检测
1.3 羊血清抗体
1.3.1 羊血清抗体简介
1.3.2 羊血清抗体的纯化
1.4 辣根过氧化物酶
1.4.1 辣根过氧化物酶简介
1.4.2 辣根过氧化物酶结构
1.4.3 辣根过氧化物酶标记抗体
1.5 酶标二抗效价的测定
1.6 研究意义
1.7 研究内容
第二章 鸡卵黄抗体的提纯
2.1 实验器材
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验主要仪器
2.1.4 实验主要试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 水稀释-乙醇分级沉淀法提纯IgY
2.2.2 氯仿-乙醇分级沉淀法提纯抗体
2.2.3 二氯甲烷-乙醇分级沉降法提纯抗体
2.2.4 氯仿粗提-DEAE琼脂糖凝胶柱层析法提纯鸡卵黄抗体
2.2.5 氯仿-硫酸铵二次沉淀法提纯鸡卵黄抗体
2.2.6 Bradford法检测IgY样品的蛋白质浓度
2.2.7 SDS-PAGE检测IgY纯度
2.3 实验结果与分析
2.3.1 提纯后的蛋白浓度及产率计算
2.3.2 SDS-PAGE检测IgY纯度
2.3.3 SDS-PAGE检测氯仿粗提-DEAE柱层析法
2.3.4 SDS-PAGE检测氯仿-硫酸铵二次沉淀法结果
第三章 羊免疫反应
3.1 实验器材
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验主要试剂的配制
3.2 实验方法
3.2.1 羊免疫反应抗原制备方法
3.2.2 羊免疫反应方法
3.2.3 SDS-PAGE检测IgY纯度
3.2.4 SDS-PAGE检测羊血浆中的总蛋白
3.3 实验结果及分析
3.3.1 一抗制备结果
3.3.2 羊免疫反应
3.3.3 羊血浆蛋白SDS-PAGE检测
第四章 羊抗体的提纯
4.1 实验器材
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.1.4 实验主要试剂的配制
4.2 实验方法
4.2.1 羊血浆的制备
4.2.2 辛酸-硫酸铵法提取羊血浆中的抗体
4.2.3 SDS-PAGE检测IgG纯度
4.3 实验结果及分析
第五章 HRP标记羊抗鸡二抗及活性检测
5.1 实验材料
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验试剂
5.1.3 实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 实验主要试剂配制
5.2.2 高碘酸钠氧化法标记抗体
5.2.3 Western Blot检测酶标二抗活性
5.2.4 HRP和酶标IgG化学发光检测
5.3 实验结果及讨论
结论
参考文献
致谢
附录A:攻读学位期间所发表的学术论文目录
本文编号：3477969
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