敖汉细毛羊Noggin基因质粒的构建及其在成纤维细胞中表达量的研究

发布时间：2021-11-06 00:52

　　本实验旨在构建敖汉细毛羊Noggin基因表达载体,将其转染至成纤维细胞中,分析Noggin基因mRNA及蛋白表达量的变化。实验以40日龄胎羊为研究对象,采集组织样品,通过PCR反应扩增目的基因片段,经切胶回收后连接到pEM-T1载体,构建pEM-T1-Noggin后转染到大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞,提取pEM-T1-Noggin后进行酶切鉴定。鉴定后符合标准即可构建pcDNA3.1-Noggin重组表达载体,转至大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞振荡培养,将重组质粒pcDNA3.1-Noggin转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Noggin基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果表明:经酶切、测序鉴定pcDNA3.1-Noggin表达载体构建成功,并成功瞬时转染成纤维细胞,转染组的mRNA及蛋白表达量均极显著高于对照组。本研究在细胞水平上验证了Noggin基因功能,为进一步在个体水平上研究Noggin基因功能奠定基础。 

【文章来源】：中国畜牧杂志. 2020,56(09)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

Noggin基因PCR扩增

1 Noggin蛋白相对表达量

对pGM-T-Noggin进行提取，结果如图2所示，pGM-T载体大小为3 015 bp、目的基因大小为699 bp，连接后条带位于3 714 bp处，与已知大小相符，表明克隆载体连接并提取成功。2.3 TA克隆测序比对

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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本文编号：3478838