口蹄疫病毒O型（缅甸98系）毒种筛选及其灭活疫苗免疫效果研究
发布时间：2021-11-06 08:33
口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease，FMD）是由口蹄疫病毒引起的猪、牛、羊等偶蹄动物的一种烈性传染病，给流行国家和地区带来严重的经济损失，筛选与田间流行毒株基因型相近的、免疫原性良好的、适合生产特性的制造疫苗毒株，将对疫情的有效控制会起到非常重要的作用。本论文针对中国农业科学院国家口蹄疫参考实验室分离鉴定的四株东南亚拓扑型缅甸98系O型口蹄疫乳鼠毒，开展了实验室乳鼠传代、实验室方瓶细胞传代驯化、生产车间细胞转瓶培养传代适应以及制作疫苗的评价工作；根据以上三阶段毒种传代过程中的收毒时间、病毒含量以及对靶动物和靶细胞的适应情况，选择出一株传代稳定、病毒含量较高的适合生产的疫苗种毒株—O/XJ/10-11株。经传代培养后，将收获的S01、S02、S03三批次病毒液分别按照工艺要求进行灭活处理，制成灭活疫苗（期间进行灭活效果检验、成品性状检验、成品安全检验等），与现行经典的OZK/93株制作的3批疫苗同时免疫经筛选的易感动物猪，在同等条件下饲养，比较疫苗免疫后28天供试猪血清抗体效价，并进行疫苗交叉攻毒保护试验，初步评估两种疫苗的免疫效果。结果显示，两种疫苗免疫动物后，都可刺...
【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
接毒前（100×）
期间每个滴度换一支吸头，取 10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9等各稀释度，接种于生长有 BHK-21 细胞单层的 96 孔培养板中，每稀释度接种 4~5 孔，每孔接毒 0.1ml，同时，设正常细胞对照。接种后置 37℃下 CO2培养箱培养 3 日，每日观察细胞病变，根据出现细胞病变孔数，按照 Reed-Muench 法计算 TCID50。3.2 结果与分析实验研究发现，O/GD/10-9 株、O/GX/10-10 株毒在 BHK-21 细胞上传代三代后，并无典型 CPE 出现，无法进行 TCID50测定，因而本实验改用 PK-15 细胞对两株毒进行传代驯化，当传至第三代，表现出一定的口蹄疫典型 CPE 后，改用 BHK-21 细胞继续传代才获得了典型 CPE。其余两株毒传代表现正常，在 BHK-21 细胞传代三代后，逐渐出现典型 CPE。四株毒种 BF5 代毒接种 BHK-21 细胞前及出现 CPE 后，细胞显微成像图如下：
图 3-3 接毒前（100×） 图 3-4 接种 O/GD/10-9 株后细胞 CPE（100×图 3-5 接毒前（100×） 图 3-6 接种 O/GX/10-10 株后细胞 CPE（100×
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛口蹄疫的预防措施[J]. 王力. 中国乳业. 2011(05)
[2]浅谈口蹄疫及混合感染的防制措施[J]. 靳巍. 吉林畜牧兽医. 2010(09)
[3]用ELISA方法检测口蹄疫抗体消长规律和免疫效果[J]. 杨宗照,母安雄,张东华,吴金平,谢正,张姝. 中国动物检疫. 2010(05)
[4]口蹄疫疫苗研究进展[J]. 张春红,黄毓茂. 畜牧与兽医. 2010(02)
[5]口蹄疫新型疫苗研究进展[J]. 白婧,许崇波,张强,高凤山. 中国畜牧兽医. 2009(11)
[6]口蹄疫疫苗的研究进展[J]. 陈里新,靳玉珠,扈荣良. 中国生物制品学杂志. 2009(03)
[7]ELISA用于口蹄疫病毒146S抗原快速定量的研究[J]. 李乐,苗海生,信爱国,廖德芳,胡骑,李华春. 中国预防兽医学报. 2008(04)
[8]口蹄疫诊断技术的研究进展[J]. 肖啸,杨继生,张静,程纬. 中国畜牧兽医. 2008(02)
[9]应用改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平[J]. 石立立,顾潮江,张倩,张玮莹,李勇,鲁彬,何成,屈三甫,郑从义. Virologica Sinica. 2006(05)
[10]国外口蹄疫流行现状分析及防治策略[J]. 高飞,孙国斌,张金凤. 北京农学院学报. 2006(01)
本文编号：3479505
【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
接毒前（100×）
期间每个滴度换一支吸头，取 10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9等各稀释度，接种于生长有 BHK-21 细胞单层的 96 孔培养板中，每稀释度接种 4~5 孔，每孔接毒 0.1ml，同时，设正常细胞对照。接种后置 37℃下 CO2培养箱培养 3 日，每日观察细胞病变，根据出现细胞病变孔数，按照 Reed-Muench 法计算 TCID50。3.2 结果与分析实验研究发现，O/GD/10-9 株、O/GX/10-10 株毒在 BHK-21 细胞上传代三代后，并无典型 CPE 出现，无法进行 TCID50测定，因而本实验改用 PK-15 细胞对两株毒进行传代驯化，当传至第三代，表现出一定的口蹄疫典型 CPE 后，改用 BHK-21 细胞继续传代才获得了典型 CPE。其余两株毒传代表现正常，在 BHK-21 细胞传代三代后，逐渐出现典型 CPE。四株毒种 BF5 代毒接种 BHK-21 细胞前及出现 CPE 后，细胞显微成像图如下：
图 3-3 接毒前（100×） 图 3-4 接种 O/GD/10-9 株后细胞 CPE（100×图 3-5 接毒前（100×） 图 3-6 接种 O/GX/10-10 株后细胞 CPE（100×
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛口蹄疫的预防措施[J]. 王力. 中国乳业. 2011(05)
[2]浅谈口蹄疫及混合感染的防制措施[J]. 靳巍. 吉林畜牧兽医. 2010(09)
[3]用ELISA方法检测口蹄疫抗体消长规律和免疫效果[J]. 杨宗照,母安雄,张东华,吴金平,谢正,张姝. 中国动物检疫. 2010(05)
[4]口蹄疫疫苗研究进展[J]. 张春红,黄毓茂. 畜牧与兽医. 2010(02)
[5]口蹄疫新型疫苗研究进展[J]. 白婧,许崇波,张强,高凤山. 中国畜牧兽医. 2009(11)
[6]口蹄疫疫苗的研究进展[J]. 陈里新,靳玉珠,扈荣良. 中国生物制品学杂志. 2009(03)
[7]ELISA用于口蹄疫病毒146S抗原快速定量的研究[J]. 李乐,苗海生,信爱国,廖德芳,胡骑,李华春. 中国预防兽医学报. 2008(04)
[8]口蹄疫诊断技术的研究进展[J]. 肖啸,杨继生,张静,程纬. 中国畜牧兽医. 2008(02)
[9]应用改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平[J]. 石立立,顾潮江,张倩,张玮莹,李勇,鲁彬,何成,屈三甫,郑从义. Virologica Sinica. 2006(05)
[10]国外口蹄疫流行现状分析及防治策略[J]. 高飞,孙国斌,张金凤. 北京农学院学报. 2006(01)
本文编号：3479505
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