无角间性奶山羊PISRT1、FOXL2基因及PIS区域研究
发布时间：2021-11-07 06:21
无角间性综合症（Polled Intersex Syndrome，PIS）是由于一段位于1q23的11.7kbDNA序列的缺失导致山羊无角与间性紧密连锁的一种疾病。研究发现，11.7kb的DNA片段为非编码序列，但表现出转录调控的作用，被调控的基因至少存在2个：PIS区调控的第一个转录产物PISRT1（PIS regulated transcript number1）和叉头蛋白FOXL2（forkhead box L2）。山羊PISRT1基因不编码蛋白质，在转录水平发挥其功能，目前已初步认定为睾丸抑制因子。FOXL2基因编码一个典型的叉头蛋白转录因子，具有决定卵巢发育的作用。PIS区域的缺失并不是引起山羊间性的唯一原因，为探究山羊间性的作用机制，本研究从唐山奶山羊的性别鉴定入手，探究了奶山羊性别遗传学基础；对PISRT1和FOXL2基因多态性进行分析并探究两基因在间性和正常奶山羊中的变异差异以及两基因的相互作用关系；使用生物信息学软件预测了山羊PISRT1、FOXL2基因的启动子区，并对FOXL2基因启动子区进行了活性分析。通过对34只间性奶山羊性别决定基因SRY的PCR扩增结果表明，...
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PIS区域结构图
及来源28 个正常唐山奶山羊血样和 33 个间性唐山奶山羊血样均由实大肠杆菌 DH5α 菌种由本实验室冻存。MD 19-T 载体为宝生物工程有限公司产品；绿色荧光蛋白质粒asic 、pGL3-Control、PRL-TK 载体均由北京原平皓生物技术 载体缺失真核启动子及增强子等转录元件，但包含多种酶切位0 poly A 信号（如图 2-1）。因此，pGL3-Basic 质粒转染细胞后因上游酶切位点插入的目的基因片段是否具有转录活性。pG的 Luc 基因上游插入了 SV40 启动子并且在下游插入了 SV40 的细胞中会表达荧光素酶 Luc 报告基因；PRL-TK 载体有 HSV种细胞中组成性的表达海肾荧光素酶，同样该质粒由北京原平
表 2-3 扩增山羊 PISRT1 基因序列引物Table 2-3 Primers for amplification of PISRT1 gene in goat名称 引物序列 产物长度PIS1-1S CTGGGTATCTAGATGGATGAGGCPIS1-1A CCATGTGTCTGAACCCCAGTC745bpPISrt1-2S GATGTTTATGTGTGCACGCTCCPISrt1-2A ACCGAGGAGGAAATTCACACAG820bpPISrt1-3S CACTTTCTGGCATGATGGATGGPISrt1-3A CCTTCACTTGCCTTCTTGCCTC720bp 启动子生物信息学分析于 PISRT1 和 FOXL2 基因的生物信息学分析主要由以下三个方面组成：（1）确定基应的转录本和其所对应的蛋白质，明确其 mRNA 和 gDNA 序列；（2）搜索及确定的 mRNA 序列；（3）利用生物信息学软件对 PISRT1 基因和 FOXL2 基因 5'末端附近的行一系列的分析，如 CpG 岛分析、核心启动子预测、转录因子结合位点的预测。如图 2-2 所示：
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪TREM-1基因的克隆与启动子分析[J]. 李辉,应诗家,施振旦. 江苏农业学报. 2013(05)
[2]马铃薯Sgt1基因启动子的结构及功能分析[J]. 魏桂民,张金文,王蒂,张俊莲,陆艳梅,高宜峰. 中国生物化学与分子生物学报. 2013(10)
[3]家蝇Denfensin-1基因的克隆、诱导表达及启动子活性分析[J]. 卢丹,郑立,王欣欣,王凡,唐婷,柳峰松. 昆虫学报. 2013(08)
[4]大豆油酸脱氢酶基因启动子的克隆及其表达活性分析[J]. 赵艳,沙伟,张梅娟,杨晓杰,范震宇,王艳梅. 中国生物工程杂志. 2013(04)
[5]酚/氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA[J]. 曹果清,莫清珊,陈凤仙. 安徽农业科学. 2009(34)
[6]无角山羊间性综合征缺失片段的序列特征[J]. 李东锋,周荣艳,李祥龙,李兰会,冯付军,徐厚刚. 畜牧兽医学报. 2008(09)
[7]密码对的使用与基因组进化[J]. 王芳平,李宏. 生物物理学报. 2007(03)
[8]高等植物启动子的研究进展[J]. 李杰,张福城,王文泉,黄丽云. 生物技术通讯. 2006(04)
[9]高等植物启动子功能和结构研究进展[J]. 夏江东,程在全,吴渝生,季鹏章. 云南农业大学学报. 2006(01)
[10]玉米Ubiquitin启动子的克隆及功能鉴定[J]. 王昌涛,梁粤,王欢,张宝石,赵琦,张世煌. 沈阳农业大学学报. 2006(01)
硕士论文
[1]无角间性奶山羊FOXL2基因及PIS区域变异研究[D]. 张晶晶.河北农业大学 2010
[2]菊花泛素延伸蛋白基因启动子DgUEP的克隆和功能初探[D]. 唐晓凤.四川农业大学 2009
本文编号：3481334
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PIS区域结构图
及来源28 个正常唐山奶山羊血样和 33 个间性唐山奶山羊血样均由实大肠杆菌 DH5α 菌种由本实验室冻存。MD 19-T 载体为宝生物工程有限公司产品；绿色荧光蛋白质粒asic 、pGL3-Control、PRL-TK 载体均由北京原平皓生物技术 载体缺失真核启动子及增强子等转录元件，但包含多种酶切位0 poly A 信号（如图 2-1）。因此，pGL3-Basic 质粒转染细胞后因上游酶切位点插入的目的基因片段是否具有转录活性。pG的 Luc 基因上游插入了 SV40 启动子并且在下游插入了 SV40 的细胞中会表达荧光素酶 Luc 报告基因；PRL-TK 载体有 HSV种细胞中组成性的表达海肾荧光素酶，同样该质粒由北京原平
表 2-3 扩增山羊 PISRT1 基因序列引物Table 2-3 Primers for amplification of PISRT1 gene in goat名称 引物序列 产物长度PIS1-1S CTGGGTATCTAGATGGATGAGGCPIS1-1A CCATGTGTCTGAACCCCAGTC745bpPISrt1-2S GATGTTTATGTGTGCACGCTCCPISrt1-2A ACCGAGGAGGAAATTCACACAG820bpPISrt1-3S CACTTTCTGGCATGATGGATGGPISrt1-3A CCTTCACTTGCCTTCTTGCCTC720bp 启动子生物信息学分析于 PISRT1 和 FOXL2 基因的生物信息学分析主要由以下三个方面组成：（1）确定基应的转录本和其所对应的蛋白质，明确其 mRNA 和 gDNA 序列；（2）搜索及确定的 mRNA 序列；（3）利用生物信息学软件对 PISRT1 基因和 FOXL2 基因 5'末端附近的行一系列的分析，如 CpG 岛分析、核心启动子预测、转录因子结合位点的预测。如图 2-2 所示：
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪TREM-1基因的克隆与启动子分析[J]. 李辉,应诗家,施振旦. 江苏农业学报. 2013(05)
[2]马铃薯Sgt1基因启动子的结构及功能分析[J]. 魏桂民,张金文,王蒂,张俊莲,陆艳梅,高宜峰. 中国生物化学与分子生物学报. 2013(10)
[3]家蝇Denfensin-1基因的克隆、诱导表达及启动子活性分析[J]. 卢丹,郑立,王欣欣,王凡,唐婷,柳峰松. 昆虫学报. 2013(08)
[4]大豆油酸脱氢酶基因启动子的克隆及其表达活性分析[J]. 赵艳,沙伟,张梅娟,杨晓杰,范震宇,王艳梅. 中国生物工程杂志. 2013(04)
[5]酚/氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA[J]. 曹果清,莫清珊,陈凤仙. 安徽农业科学. 2009(34)
[6]无角山羊间性综合征缺失片段的序列特征[J]. 李东锋,周荣艳,李祥龙,李兰会,冯付军,徐厚刚. 畜牧兽医学报. 2008(09)
[7]密码对的使用与基因组进化[J]. 王芳平,李宏. 生物物理学报. 2007(03)
[8]高等植物启动子的研究进展[J]. 李杰,张福城,王文泉,黄丽云. 生物技术通讯. 2006(04)
[9]高等植物启动子功能和结构研究进展[J]. 夏江东,程在全,吴渝生,季鹏章. 云南农业大学学报. 2006(01)
[10]玉米Ubiquitin启动子的克隆及功能鉴定[J]. 王昌涛,梁粤,王欢,张宝石,赵琦,张世煌. 沈阳农业大学学报. 2006(01)
硕士论文
[1]无角间性奶山羊FOXL2基因及PIS区域变异研究[D]. 张晶晶.河北农业大学 2010
[2]菊花泛素延伸蛋白基因启动子DgUEP的克隆和功能初探[D]. 唐晓凤.四川农业大学 2009
本文编号：3481334
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