H1N1亚型流感病毒NS1效应区位点变异效应研究
发布时间:2021-11-08 05:06
本研究利用定点突变技术,对H1N1亚型流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)毒株NS1蛋白效应区的108、123、125和189位进行氨基酸的4位点协同突变,再对这4个位点分别进行氨基酸的单位点突变,构建未变异的NS1重组表达质粒pCAGGS-NS1wt以及变异的NS1重组表达质粒pCAGGS-NS1mut,包括pCAGGS-NS1R108K、pCAGGS-NS1V123I、pCAGGS-NS1E125D、pCAGGS-NS1G189D、pCAGGS-NS1pdm。应用反向遗传技术拯救出野生型未变异病毒ReNS1wt以及5株位点变异病毒ReNS1R108K、ReNS1V123I、ReNS1E125D、ReNS1G189D、ReNS1pdm。双荧光素酶实验结果显示,与对照组相比,NS1...
【文章来源】:吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:82 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
流感病毒的粒子结构图
第一篇文献综述A型流感病毒NS1蛋白研究进展4分开[13]。此外,NS1蛋白还具有2个核定位信号序列(nuclearlocalizationsequence,NLS)和1个核输出信号(nuclearexportsignal,NES)两个NLS分别位于RBD和ED,其中位于RBD的NLS由位于第35~41位氨基酸的RLRRDQK组成[14],位于ED的NLS由位于第219~237位氨基酸的KRKMARTARSKVRRDKMAD组成,部分NS1蛋白由于C端的截短具有1个NLS,NES由位于第138~147位氨基酸的FDRLETLILL组成[15]。通过X射线衍射技术解析NS1蛋白的晶体结构,ED结构域的3个β-折叠的整体平移,致使ED的作用界面发生变化,因此全长NS1蛋白晶体中,NS1蛋白并不是简单的2个单体聚集构成二聚体结构,而是一个NS1单体的RBD和ED分别与另一个单体的RBD和ED相互作用产生交互式结合的锁链二聚体结构[16],每3条二聚体又形成一个螺旋状管状寡聚[17]。下图2008年对非结构蛋白NS1X-衍射晶体结构首次测定解析。图1.2非结构蛋白NS1X-衍射晶体结构(Bornholdt,ZacharyA,Prasad,B.V,2008)Figure1.2X-raydiffractioncrystalstructureofnon-structuralproteinNS1(Bornholdt,ZacharyA,Prasad,B.V,2008)2.1NS1蛋白的RNA结合域NS1蛋白的RBD位于N末端,由3个α螺旋(分别是第1~30位氨基酸,第
第一篇文献综述A型流感病毒NS1蛋白研究进展6Ⅱ(Polyadenylatebindingprotein,PABII)结合时,宿主细胞的前体RNA受到抑制,3’端的修饰或细胞核内poly(A)尾的延长受阻,进而抑制宿主自身mRNA的产生及核输出(包括在抗病毒作用中发挥重要作用的IFN-β的mRNA);除此之外,NS1蛋白还可与双链RNA依赖的蛋白激酶(double-strandedRNA-dependentproteinkinases,PKR)、p85β蛋白、TRIM25蛋白和一些PDZ结构域的配体蛋白等相互作用,从而发挥不同的功能[28]。蛋白的ED功能包括阻断宿主mRNA的剪接、多聚腺苷酸化、抑制mRNA核转运的细胞蛋白结合等。研究表明,CPSF与IFN-β非依赖性细胞抗病毒蛋白mRNA合成密切相关,宿主细胞内CPSF可特异性地识别AAUAA序列,从而修饰mRNA,其中NS1蛋白的以186位氨基酸为中心的5个氨基酸残基是其与CPSF30kDa亚基的结合位点[29],当两者相结合,宿主细胞内的前体mRNA的生成受到抑制,进而抑制IFN-β的mRNA合成的数量[30],抑制了宿主的抗病毒免疫反应。目前只解析了NS1-CPSF30复合物的晶体结构。NS1蛋白的ED晶体学研究显示,每个单体由7个β-链和3个α-螺旋组成[31,32],且都可以独立地进行二聚化,NS1蛋白除去少量loop区和羧基末端,大部分的二级结构均相同[33,34]。研究表明,3条NS1长链二聚体形成一个螺旋状管状寡聚,而所有已知的效应区配体结合位点全部暴露在寡聚体外表面,结合dsRNA的关键氨基酸位于中心通道的表面。NS1蛋白ED单体链折叠模式基本相同,但是二聚体相互作用界面结合模式差异很大,具体原因有待深入研究[35]。图1.3NS1蛋白的结构及其互作蛋白示意图(Qian,2017)Figure1.3SchematicrepresentationoftheprimarystructureofNS1protein,togetherwithitsknowninteractionpartners(Qian,2017)
本文编号:3483062
【文章来源】:吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:82 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
流感病毒的粒子结构图
第一篇文献综述A型流感病毒NS1蛋白研究进展4分开[13]。此外,NS1蛋白还具有2个核定位信号序列(nuclearlocalizationsequence,NLS)和1个核输出信号(nuclearexportsignal,NES)两个NLS分别位于RBD和ED,其中位于RBD的NLS由位于第35~41位氨基酸的RLRRDQK组成[14],位于ED的NLS由位于第219~237位氨基酸的KRKMARTARSKVRRDKMAD组成,部分NS1蛋白由于C端的截短具有1个NLS,NES由位于第138~147位氨基酸的FDRLETLILL组成[15]。通过X射线衍射技术解析NS1蛋白的晶体结构,ED结构域的3个β-折叠的整体平移,致使ED的作用界面发生变化,因此全长NS1蛋白晶体中,NS1蛋白并不是简单的2个单体聚集构成二聚体结构,而是一个NS1单体的RBD和ED分别与另一个单体的RBD和ED相互作用产生交互式结合的锁链二聚体结构[16],每3条二聚体又形成一个螺旋状管状寡聚[17]。下图2008年对非结构蛋白NS1X-衍射晶体结构首次测定解析。图1.2非结构蛋白NS1X-衍射晶体结构(Bornholdt,ZacharyA,Prasad,B.V,2008)Figure1.2X-raydiffractioncrystalstructureofnon-structuralproteinNS1(Bornholdt,ZacharyA,Prasad,B.V,2008)2.1NS1蛋白的RNA结合域NS1蛋白的RBD位于N末端,由3个α螺旋(分别是第1~30位氨基酸,第
第一篇文献综述A型流感病毒NS1蛋白研究进展6Ⅱ(Polyadenylatebindingprotein,PABII)结合时,宿主细胞的前体RNA受到抑制,3’端的修饰或细胞核内poly(A)尾的延长受阻,进而抑制宿主自身mRNA的产生及核输出(包括在抗病毒作用中发挥重要作用的IFN-β的mRNA);除此之外,NS1蛋白还可与双链RNA依赖的蛋白激酶(double-strandedRNA-dependentproteinkinases,PKR)、p85β蛋白、TRIM25蛋白和一些PDZ结构域的配体蛋白等相互作用,从而发挥不同的功能[28]。蛋白的ED功能包括阻断宿主mRNA的剪接、多聚腺苷酸化、抑制mRNA核转运的细胞蛋白结合等。研究表明,CPSF与IFN-β非依赖性细胞抗病毒蛋白mRNA合成密切相关,宿主细胞内CPSF可特异性地识别AAUAA序列,从而修饰mRNA,其中NS1蛋白的以186位氨基酸为中心的5个氨基酸残基是其与CPSF30kDa亚基的结合位点[29],当两者相结合,宿主细胞内的前体mRNA的生成受到抑制,进而抑制IFN-β的mRNA合成的数量[30],抑制了宿主的抗病毒免疫反应。目前只解析了NS1-CPSF30复合物的晶体结构。NS1蛋白的ED晶体学研究显示,每个单体由7个β-链和3个α-螺旋组成[31,32],且都可以独立地进行二聚化,NS1蛋白除去少量loop区和羧基末端,大部分的二级结构均相同[33,34]。研究表明,3条NS1长链二聚体形成一个螺旋状管状寡聚,而所有已知的效应区配体结合位点全部暴露在寡聚体外表面,结合dsRNA的关键氨基酸位于中心通道的表面。NS1蛋白ED单体链折叠模式基本相同,但是二聚体相互作用界面结合模式差异很大,具体原因有待深入研究[35]。图1.3NS1蛋白的结构及其互作蛋白示意图(Qian,2017)Figure1.3SchematicrepresentationoftheprimarystructureofNS1protein,togetherwithitsknowninteractionpartners(Qian,2017)
本文编号:3483062
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3483062.html