猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

发布时间：2021-11-08 09:44

　　为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）糖基化囊膜蛋白GP5,以及制备其多克隆抗体,以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5基因,并克隆至原核表达载体pET-32a（+）,构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,加入IPTG低温诱导表达。使用亲和层析法纯化PRRSV GP5蛋白。然后将纯化的蛋白免疫北京大耳白兔制备多克隆抗体,并进行酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光分析（IFA）。结果显示,表达的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量大约30 kDa;制备的GP5蛋白多克隆抗体ELISA效价可达1:64 000;IFA检测显示,制备的多克隆抗体能够识别PRRSV。重组PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗体的成功制备为PRRSV血清学检测方法的建立提供了良好的生物学材料。 

【文章来源】：中国动物检疫. 2020,37(10)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

GP5基因PCR扩增结果

p ET-32a-GP5重组质粒双酶切电泳检测结果

利用镍柱，对菌体裂解产物上清中的GP5蛋白进行纯化。SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色结果显示，含重组表达质粒p ET-32a-GP5的菌体在IPTG的诱导下表达出了一条约30 k Da的蛋白条带（图3），通过纯化、浓缩，获得了GP5蛋白。经BCA试剂盒测定该蛋白的终浓度为223.84μg/m L。2.3 GP5蛋白Western Blot检测

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]两株猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒全基因组序列比较分析[D]. 王业华.内蒙古农业大学 2016
[2]PRRSV GP5蛋白基因疫苗的构建及鉴定和三种分子佐剂的制备[D]. 姜丹丹.山东农业大学 2016
[3]Marc-145细胞内GP5表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的影响[D]. 张茂东.西北农林科技大学 2015
[4]基于母猪PRRS抗体水平确定仔猪疫苗首免日龄的研究[D]. 梁百里.湖南农业大学 2014
[5]PRRSV GP5基因亚克隆、原核表达及ELISA抗体检测方法的建立[D]. 李建辉.河北农业大学 2012
[6]PRRSV CH-1a株致弱过程中的遗传变异分析及CH-1R株全长cDNA分子克隆的构建[D]. 石文达.东北农业大学 2008



本文编号：3483487