短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus 4D-14）的分离与分子鉴定，抑菌性及微生态制剂应用研究
发布时间：2021-11-08 13:17
本论文首先在微量肉汤稀释法基础上建立了实验室96孔板快速筛选方法；然后从疫病多发的养殖场土壤和市场动物微生态产品中分离到多株芽孢杆菌；选取部分从土壤中分离的芽孢杆菌菌株，利用鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）ATCC14028作为指示菌进行芽孢杆菌抑菌能力初筛，得到来源于养殖场土壤的抑菌型芽孢杆菌7株；将抑菌效果较突出的7株芽孢杆菌和市场产品中分离的芽孢杆菌进一步用4株不同血清型动物源病原菌大肠杆菌（Escherichia coli）E1、E3、E4，及鸡沙门氏菌（Salmonella gallinarum）SC1，猪沙门氏菌（Salmonella choleraesuis）和SP1绿脓杆菌（pseudomonas aeruginosa）等进行了抑菌能力评价，发现来自土壤的芽孢杆菌菌株4D-14和J-14，及来自市场产品的芽孢杆菌菌株Y14和Y16等，体外抑菌效果与20ppm的硫酸粘杆菌素相当。使用16SrRNA及gyrB基因分子鉴定法，对来自养殖场土壤和市场产品的抑菌型芽孢杆菌菌株进行了鉴定。发现养殖场土壤来源的抑菌型芽孢杆菌以蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和...
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 微生态概述
1.1.1 微生态的定义及其演变
1.1.2 微生态发展历史
1.1.3 微生态的保健作用
1.1.4 微生态作用机理研究进展
1.1.5 微生态研究热点
A 益生菌基因组分析
B 益生菌作为载体表达功能基因
1.1.6 微生态的应用
A 微生态在饲料中的应用
B 微生态在养殖中的应用
C 微生态在医药保健中的应用
D 微生态在功能食品中的应用
1.2 动物微生态
1.2.1 动物微生态研究概况
1.2.2 动物微生态允许使用的菌种
1.2.3 动物微生态制剂技术
A 动物微生态制剂工艺流程概况
B 发酵工艺
C 固液分离技术
1）板框压滤
2）膜过滤
3）离心
D 干燥技术
1）气流干燥
2）沸腾干燥
3）喷雾干燥
4）冷冻干燥
E 后处理技术
F 动物微生态应用配套技术
1.2.4 国内微生态行业发展现状与存在的问题
1.3 我国家禽养殖业
1.3.1 家禽养殖业质量安全体系建设
1.3.2 抗生素在养殖业的应用
1.3.3 兽用抗生素的残留情况
1.3.4 如何减少饲料中抗生素的使用
1.4 本文选题依据与意义
1.5 本文的研究内容
2 抑菌性芽孢杆菌的筛选
前言
2.1 材料
2.1.1 药品与试剂
2.1.2 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 养殖场土壤及市场微生态产品中芽孢杆菌的分离与纯化
2.2.2 养殖场土壤来源芽孢杆菌抑菌性能初筛
2.2.3 土壤来源抑菌型芽孢杆菌抑菌性能评价
2.2.4 市场动物微生态产品来源芽孢杆菌抑菌性能评价
2.3 结果与讨论
2.3.1 养殖场土壤及市场微生态产品中芽孢杆菌的分离与纯化
A 分离自养殖场土壤的芽孢杆菌
B 分离自市场微生态产品的芽孢杆菌
2.3.2 部分养殖场土壤来源的芽孢杆菌抑菌性能初筛
2.3.3 土壤来源抑菌型芽孢杆菌抑菌性能评价
2.3.4 市场动物微生态产品来源芽孢杆菌抑菌性能评价
2.4 小结
3 抑菌型芽孢杆菌的分子鉴定
前言
3.1 材料
3.1.1 药品与试剂
3.1.2 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 新鲜菌液制备
3.2.2 菌株基因组 DNA 提取
A PCR 扩增 16S R RNA 序列
B PCR 扩增 GYR B 基因序列
3.3 结果与讨论
3.3.1 16S R RNA 鉴定结果
3.3.2 GYR B 基因鉴定结果
3.3.3 抑菌型短小芽孢杆菌 4D-14 系统发育情况分析
A 16S R RNA 及 GYR B 基因序列的克隆
B 基于 16S R RNA 序列的系统发育分析
C 基于 GYR B 基因序列的系统发育分析
3.4 小结
4 芽孢杆菌上清液抑菌活性物的性质分析
前言
4.1 材料
4.1.1 药品与试剂
4.1.2 主要仪器
4.2 方法
4.2.1 病原菌培养
4.2.2 对照组
4.2.3 芽孢杆菌上清液处理组
4.2.4 抑菌率计算
4.3 结果与讨论
4.3.1 蛋白酶对抑菌物质的影响
4.3.2 温度对抑菌物质的影响
4.3.3 PH 对抑菌物质的影响
4.4 小结
5 抑菌型芽孢杆菌微生态制剂
前言
5.1 材料
5.1.1 药品与试剂
5.1.2 主要仪器
5.2 方法
5.2.1 工艺流程
5.2.2 发酵罐与培养基准备
5.2.3 发酵及后处理
A 发酵
B 发酵液后处理
5.2.4 芽孢杆菌样品菌量计数
5.3 结果与讨论
5.4 小结
6 肉鸡养殖试验
前言
6.1 材料
6.1.1 药品与试剂
A 抗生素与微生态制剂等
B 动物品种及基础日粮
6.1.2 主要仪器
6.2 方法
6.2.1 试验设计
6.2.2 饲养管理
6.2.3 测定指标
A 生产性能
B 粪便中的微生物
C 免疫水平
D 免疫器官指数
E 肠道形态结构观察
6.2.4 数据分析
6.3 结果与讨论
6.3.1 对肉鸡生产性能的影响
A 对 0-7 日龄肉鸡生产性能的影响
B 对 8-21 日龄肉鸡生产性能的影响
C 对 22-35 日龄肉鸡生产性能的影响
D 对 0-35 日龄肉鸡生产性能的影响
6.3.2 对粪便中微生物的影响
A 芽孢杆菌
B 乳酸杆菌
C 双歧杆菌
D 大肠杆菌
E 沙门氏菌
F 产气荚膜梭菌
6.3.3 免疫水平
6.3.4 免疫器官发育程度
A 免疫器官发育程度判定标准
B 免疫器官指数
6.3.5 肠道形态结构观察
A 肠道观察测量参考
B 肠道形态观察结果
6.4 小结
全文总结
创新性
参考文献
个人简历、在学期间发表的学术论文与科研项目、研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物饲料添加剂的主要功能及其研究进展[J]. 徐鹏,董晓芳,佟建明. 动物营养学报. 2012(08)
[2]我国家禽养殖业现状与发展趋势[J]. 袁正东. 中国家禽. 2011(03)
[3]利用16S rDNA结合gyrA和gyrB基因对生防芽孢杆菌R31的快速鉴定[J]. 喻国辉,牛春艳,陈远凤,陈燕红,杨紫红. 中国生物防治. 2010(02)
[4]gyrB基因在细菌分类和检测中的应用[J]. 安然,易图永,肖启明,邓子牛. 江西农业学报. 2010(04)
[5]枯草芽孢杆菌制剂对蛋鸡生产性能、蛋品质和养分消化率的影响[J]. 李俊波,成廷水,吕武兴,彭鹏. 中国家禽. 2009(04)
[6]土传棉花黄萎病拮抗菌的筛选及其生物效应[J]. 张慧,杨兴明,冉炜,徐阳春,沈其荣. 土壤学报. 2008(06)
[7]兽药抗生素的残留状况与环境行为[J]. 刘吉强,诸葛玉平,杨鹤,顾继光. 土壤通报. 2008(05)
[8]养殖业抗生素的使用及其潜在危害[J]. 王云鹏,马越. 中国抗生素杂志. 2008(09)
[9]高产酶活枯草芽孢杆菌制剂在奶牛生产上的应用研究[J]. 王振华. 安徽农业科学. 2008(27)
[10]乳酸菌类微生物制剂的研究[J]. 陈红梅. 饲料研究. 2008(08)
博士论文
[1]基于海藻酸钠的微胶囊构建技术及其在干态乳酸菌中的应用[D]. 李晓岩.中国海洋大学 2009
硕士论文
[1]凝结芽孢杆菌和费氏丙酸杆菌发酵及制剂工艺研究[D]. 崔东良.河北大学 2008
[2]地衣芽孢杆菌制剂对肉仔鸡、断奶仔猪生产性能的影响及机理[D]. 王洪燕.中国农业大学 2005
本文编号：3483774
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 微生态概述
1.1.1 微生态的定义及其演变
1.1.2 微生态发展历史
1.1.3 微生态的保健作用
1.1.4 微生态作用机理研究进展
1.1.5 微生态研究热点
A 益生菌基因组分析
B 益生菌作为载体表达功能基因
1.1.6 微生态的应用
A 微生态在饲料中的应用
B 微生态在养殖中的应用
C 微生态在医药保健中的应用
D 微生态在功能食品中的应用
1.2 动物微生态
1.2.1 动物微生态研究概况
1.2.2 动物微生态允许使用的菌种
1.2.3 动物微生态制剂技术
A 动物微生态制剂工艺流程概况
B 发酵工艺
C 固液分离技术
1）板框压滤
2）膜过滤
3）离心
D 干燥技术
1）气流干燥
2）沸腾干燥
3）喷雾干燥
4）冷冻干燥
E 后处理技术
F 动物微生态应用配套技术
1.2.4 国内微生态行业发展现状与存在的问题
1.3 我国家禽养殖业
1.3.1 家禽养殖业质量安全体系建设
1.3.2 抗生素在养殖业的应用
1.3.3 兽用抗生素的残留情况
1.3.4 如何减少饲料中抗生素的使用
1.4 本文选题依据与意义
1.5 本文的研究内容
2 抑菌性芽孢杆菌的筛选
前言
2.1 材料
2.1.1 药品与试剂
2.1.2 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 养殖场土壤及市场微生态产品中芽孢杆菌的分离与纯化
2.2.2 养殖场土壤来源芽孢杆菌抑菌性能初筛
2.2.3 土壤来源抑菌型芽孢杆菌抑菌性能评价
2.2.4 市场动物微生态产品来源芽孢杆菌抑菌性能评价
2.3 结果与讨论
2.3.1 养殖场土壤及市场微生态产品中芽孢杆菌的分离与纯化
A 分离自养殖场土壤的芽孢杆菌
B 分离自市场微生态产品的芽孢杆菌
2.3.2 部分养殖场土壤来源的芽孢杆菌抑菌性能初筛
2.3.3 土壤来源抑菌型芽孢杆菌抑菌性能评价
2.3.4 市场动物微生态产品来源芽孢杆菌抑菌性能评价
2.4 小结
3 抑菌型芽孢杆菌的分子鉴定
前言
3.1 材料
3.1.1 药品与试剂
3.1.2 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 新鲜菌液制备
3.2.2 菌株基因组 DNA 提取
A PCR 扩增 16S R RNA 序列
B PCR 扩增 GYR B 基因序列
3.3 结果与讨论
3.3.1 16S R RNA 鉴定结果
3.3.2 GYR B 基因鉴定结果
3.3.3 抑菌型短小芽孢杆菌 4D-14 系统发育情况分析
A 16S R RNA 及 GYR B 基因序列的克隆
B 基于 16S R RNA 序列的系统发育分析
C 基于 GYR B 基因序列的系统发育分析
3.4 小结
4 芽孢杆菌上清液抑菌活性物的性质分析
前言
4.1 材料
4.1.1 药品与试剂
4.1.2 主要仪器
4.2 方法
4.2.1 病原菌培养
4.2.2 对照组
4.2.3 芽孢杆菌上清液处理组
4.2.4 抑菌率计算
4.3 结果与讨论
4.3.1 蛋白酶对抑菌物质的影响
4.3.2 温度对抑菌物质的影响
4.3.3 PH 对抑菌物质的影响
4.4 小结
5 抑菌型芽孢杆菌微生态制剂
前言
5.1 材料
5.1.1 药品与试剂
5.1.2 主要仪器
5.2 方法
5.2.1 工艺流程
5.2.2 发酵罐与培养基准备
5.2.3 发酵及后处理
A 发酵
B 发酵液后处理
5.2.4 芽孢杆菌样品菌量计数
5.3 结果与讨论
5.4 小结
6 肉鸡养殖试验
前言
6.1 材料
6.1.1 药品与试剂
A 抗生素与微生态制剂等
B 动物品种及基础日粮
6.1.2 主要仪器
6.2 方法
6.2.1 试验设计
6.2.2 饲养管理
6.2.3 测定指标
A 生产性能
B 粪便中的微生物
C 免疫水平
D 免疫器官指数
E 肠道形态结构观察
6.2.4 数据分析
6.3 结果与讨论
6.3.1 对肉鸡生产性能的影响
A 对 0-7 日龄肉鸡生产性能的影响
B 对 8-21 日龄肉鸡生产性能的影响
C 对 22-35 日龄肉鸡生产性能的影响
D 对 0-35 日龄肉鸡生产性能的影响
6.3.2 对粪便中微生物的影响
A 芽孢杆菌
B 乳酸杆菌
C 双歧杆菌
D 大肠杆菌
E 沙门氏菌
F 产气荚膜梭菌
6.3.3 免疫水平
6.3.4 免疫器官发育程度
A 免疫器官发育程度判定标准
B 免疫器官指数
6.3.5 肠道形态结构观察
A 肠道观察测量参考
B 肠道形态观察结果
6.4 小结
全文总结
创新性
参考文献
个人简历、在学期间发表的学术论文与科研项目、研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物饲料添加剂的主要功能及其研究进展[J]. 徐鹏,董晓芳,佟建明. 动物营养学报. 2012(08)
[2]我国家禽养殖业现状与发展趋势[J]. 袁正东. 中国家禽. 2011(03)
[3]利用16S rDNA结合gyrA和gyrB基因对生防芽孢杆菌R31的快速鉴定[J]. 喻国辉,牛春艳,陈远凤,陈燕红,杨紫红. 中国生物防治. 2010(02)
[4]gyrB基因在细菌分类和检测中的应用[J]. 安然,易图永,肖启明,邓子牛. 江西农业学报. 2010(04)
[5]枯草芽孢杆菌制剂对蛋鸡生产性能、蛋品质和养分消化率的影响[J]. 李俊波,成廷水,吕武兴,彭鹏. 中国家禽. 2009(04)
[6]土传棉花黄萎病拮抗菌的筛选及其生物效应[J]. 张慧,杨兴明,冉炜,徐阳春,沈其荣. 土壤学报. 2008(06)
[7]兽药抗生素的残留状况与环境行为[J]. 刘吉强,诸葛玉平,杨鹤,顾继光. 土壤通报. 2008(05)
[8]养殖业抗生素的使用及其潜在危害[J]. 王云鹏,马越. 中国抗生素杂志. 2008(09)
[9]高产酶活枯草芽孢杆菌制剂在奶牛生产上的应用研究[J]. 王振华. 安徽农业科学. 2008(27)
[10]乳酸菌类微生物制剂的研究[J]. 陈红梅. 饲料研究. 2008(08)
博士论文
[1]基于海藻酸钠的微胶囊构建技术及其在干态乳酸菌中的应用[D]. 李晓岩.中国海洋大学 2009
硕士论文
[1]凝结芽孢杆菌和费氏丙酸杆菌发酵及制剂工艺研究[D]. 崔东良.河北大学 2008
[2]地衣芽孢杆菌制剂对肉仔鸡、断奶仔猪生产性能的影响及机理[D]. 王洪燕.中国农业大学 2005
本文编号：3483774
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