牛病毒性腹泻病毒E rns 多表位蛋白的设计及验证

发布时间：2021-11-09 11:14

　　利用生物信息学方法分析牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E^rns蛋白,筛选出优势B淋巴细胞（简称B细胞）和T淋巴细胞（简称T细胞）表位组装成多表位蛋白,并在大肠埃希菌中进行表达和验证。首先从NCBI GenBank数据库获得E^rns蛋白的氨基酸序列,将所得到的序列进行理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位、磷酸化、酰基化位点分析,预测二级结构及二硫键的位置,使用4种B细胞和2种T细胞软件预测其抗原表位,将预测的表位进行筛选并组装成多表位疫苗,进行密码子优化确保其在大肠埃希菌中高效表达,最后进行蛋白的纯化和Western blot验证。结果显示,E^rns蛋白由227个氨基酸残基组成,分子质量约为26 ku,理论等电点8.62,化学式为C₁₁₃₁H₁₇₆₈N₃₂₆O₃₃₅S₁₄,不稳定系数为29.98,亲水性平均值（GRAVY）和脂肪指数分别-0.529和71.37,在大肠埃希菌体内半衰期大于10 h,不具有跨膜结构域,主要定位... 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(08)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

菌液PCR鉴定结果

SDS-PAGE结果显示,在诱导后2 h、4 h、6 h和8 h得到大小约为28 ku蛋白,与理论值相符,并且在6 h时蛋白表达量达到最大(图3)。超声破碎的菌液经SDS-PAGE分析,结果显示以可溶性和包涵体两种形式表达,但以包涵体为主(图4)。2.11 多表位蛋白的纯化Western blot鉴定结果

在生物信息学快速发展的今天,设计多表位亚单位疫苗已经成为一种新的方法来引发体液和细胞免疫,增强宿主保护性免疫应答[14-15],而且设计开发的多表位嵌合抗原在用于疫苗和血清学诊断中,不仅成本较低,而且灵敏度也在不断提高[16-18]。本研究使用生物信息学方法预测并筛选出具有强免疫原性的多表位蛋白。图4 多表位蛋白表达形式的鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E0蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 丁金花,马旭升,蔡卓轩,肖盛中,吴鹏,盛金良,陈创夫.  石河子大学学报(自然科学版). 2018(01)
[2]牛病毒性腹泻病毒的研究进展[J]. 孟庆森,王炜,黄慧文,季烨,刘芳芳,夏铭崎,李真光.  当代畜牧. 2017(33)
[3]连接肽在融合蛋白设计中的选择及应用[J]. 于健,Sarra Setrerrahmane,徐寒梅.  药物生物技术. 2016(03)
[4]B细胞抗原表位预测方法的研究进展[J]. 马凡舒,张蕾,王洋,孙彦刚,闫喜军.  中国畜牧兽医. 2016(01)
[5]猪瘟疫苗防治牛病毒性腹泻黏膜病的效果观察[J]. 陆峰.  兽医导刊. 2012(07)
[6]牛病毒性腹泻病的流行病学调查[J]. 陈备娟,高全新,朱毅兴,陆仁初,李媛媛.  上海畜牧兽医通讯. 2010(05)



本文编号：3485223