肠出血性大肠杆菌志贺毒素Ⅰ型A亚单位（Stx1A）的表达及其单克隆抗体的制备

发布时间：2021-11-10 10:00

　　肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E. coli, EHEC）感染是一种重要的人畜共患病,在世界各地包括发达及发展中国家都有流行,其感染具有暴发性、强烈的致病性与致死性等特点,已成为全球性的公共卫生问题,对人类健康构成巨大威胁。EHEC感染可使人患腹泻（Diarrhea）、出血性结肠炎（Hemorrhagic Colitis, HC）,还可引发溶血性尿毒综合征（Hemolytic Uremic Syndrome, HUS）、血栓性血小板减少性紫癜（Thromboric Thromobocytopenic Porpura, TTP）等严重并发症,特别是HUS可对患者肾脏造成不可恢复性的功能损伤,病死率较高。EHEC所分泌的志贺毒素（Shiga toxin, Stx）是介导细菌致病的重要因子,Stx可以穿越破损的肠上皮细胞进入血液循环,与其受体-丙糖酰基鞘氨醇（globotriaosylceramide, Gb3）或丁糖酰基鞘氨醇（globotetraosylceramide, Gb4）结合,造成肠道、中枢神经系统等器官的损伤,特别是Gb3受体含量较高的肾脏,受损后易引... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文献综述
    1 EHEC研究进展
        1.1 EHEC概述
        1.2 EHEC病原学
        1.3 EHEC传播途径
        1.4 EHEC流行特征
        1.5 EHEC临床症状
    2 EHEC致病机理
        2.1 EHEC粘附因子
        2.2 志贺毒素(Stx)
    参考文献
第二章 肠出血性大肠杆菌O157：H7志贺毒素Ⅰ型A亚单位的表达
    摘要
    1 材料
        1.1 菌种与载体
        1.2 实验动物
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂的配制
        1.5 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 Stx1A基因的克隆
        2.2 Stx1A重组蛋白的表达和纯化
        2.3 重组蛋白的质谱鉴定
        2.4 Stx1A免疫血清的制备
        2.5 免疫转印
    3 结果
        3.1 Stx1毒素A亚单位基因的克隆
        3.2 菌落PCR鉴定
        3.3 重组质粒pET22b(+)-Stx1A核苷酸序列分析
        3.4 重组工程菌的诱导表达和纯化
        3.5 质谱鉴定结果
        3.6 免疫转印
    4 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
第三章 肠出血性大肠杆菌志贺毒素Ⅰ型A亚单位(Stx1A)单克隆抗体的制备和鉴定
    摘要
    1 材料和设备
        1.1 实验动物
        1.2 材料
        1.3 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 动物免疫
        2.2 间接ELISA检测方法的建立
        2.3 ELISA检测三次免疫后小鼠血清效价
        2.4 杂交瘤细胞系的建立及鉴定
        2.5 免疫共沉淀实验
        2.6 单克隆抗体稳定性检测结果
        2.7 单克隆抗体的纯化、保存
    3 结果
        3.1 间接ELISA方法的建立
        3.2 免疫小鼠ELISA分析结果
        3.3 杂交瘤细胞株的筛选和亚克隆
        3.4 菌株志贺毒素检测
        3.5 免疫共沉淀结果
        3.6 单克隆抗体稳定性检测结果
    4 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
全文总结
致谢
研究生期间所发表的文章



本文编号：3487071