日粮添加锌对绵羊睾丸、附睾锌转运蛋白Zips表达的影响

发布时间：2017-05-06 19:03

  本文关键词：日粮添加锌对绵羊睾丸、附睾锌转运蛋白Zips表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本文旨在研究日粮中添加不同水平锌对绵羊睾丸、附睾组织中锌转运蛋白Zips(s：1、3、6和8)表达的影响。选择体重相近(26±1.5 kg)健康的6月龄杜寒杂种公羊30只。随机分为5组,每组6只,分别饲喂基础日粮(对照组)、基础日粮+50mg/kg无机锌(ZnSO4)、基础日粮+25 mg/kg、50 mg/kg和75 mg/kg氨基酸锌。预饲期10 d,正式期60 d。最后采集睾丸、附睾头、附睾体和附睾尾。运用qRT-PCR法检、Western Blotting技术、免疫组化技术对睾丸、附睾组织中Zips(1、3、6、8) mRNA表达和Zip6蛋白表达及定位的研究。主要结果如下：1 qRT-PCR分析表明：(1)添加有机锌绵羊睾丸中Zip1 mRNA表达量显著降低(P0.05)；附睾头中Zip1 mRNA表达量随着有机锌添加量的增加而升高,且50mg/kg有机锌组和75 mg/kg有机锌组附睾头Zip1 mRNA表达量显著高于其他试验组(P0.05)；在绵羊附睾体中Zip1 mRNA表达量与附睾头中基本一致;附睾尾中Zip1 mRNA表达量因添加锌均明显下降(P0.05);(2)添加无机锌绵羊睾丸中Zip3 mRNA的表达量显著升高,而添加有机锌Zip3 mRNA的表达量明显下降(P0.05)。添加75 mg/kg有机锌组附睾头和附睾体中Zip3 mRNA的表达量显著升高(P0.05);添加锌绵羊附睾尾中Zip3 mRNA的表达量显著降低(P0.05);(3)添加75 mg/kg有机锌睾丸和附睾中Zip6 mRNA表达量显著升高(P0.05)。(4)添加两种锌源均可使绵羊睾丸中Zip8 mRNA表达量显著下降(P0.05),使附睾头中Zip8 mRNA表达量显著升高(除25 mg/kg有机锌组)(P0.05),有机锌对附睾体和附睾尾中Zip8 mRNA表达量均显著升高(P0.05)。2 Western Blotting结果：锌添加组绵羊睾丸中Zip6的蛋白表达量显著高于对照组(P0.05)；有机锌组绵羊附睾头中Zip6蛋白表达量显著升高(P0.05);添加50 mg/kg无机锌和25 mg/kg有机锌使绵羊附睾体中Zip6蛋白表达量显著升高(P0.05)。各组附睾尾中Zip6蛋白表达量没有显著差异(P0.05)。3免疫组化结果：锌转运蛋白Zip6主要定位于睾丸和附睾头中。平均光密度值显示,锌添加组睾丸和附睾头平均光密度值显著高于对照组(P0.05)。无机锌添加组附睾体平均光密度显著高于对照组(P0.05),附睾尾中各组平均光密度没有明显变化(P0.05)。结论：(1)日粮中添加锌对绵羊睾丸、附睾中Zip1、Zip3、Zip6和Zip8 mRNA表达有一定的影响,Zip6 mRNA在绵羊睾丸中特异性高表达,添加有机锌促进其表达且添加75 mg/kg有机锌表达量最高,而添加无机锌其表达没有显著变化;Zip8 mRNA在绵羊附睾体中特异性高表达,添加有机锌显著促进其表达且添加75 mg/kg有机锌表达量最高,而添加无机锌其表达没有显著变化。说明日粮添加有机锌对Zip1、Zip3、Zip6和Zip8 mRNA表达的影响大于添加无机锌。(2)日粮添加锌能促进睾丸和附睾头中锌转运蛋白Zip6的表达。(3)锌转运蛋白Zip6主要定位于精原细胞、精母细胞和附睾头假复层柱状上皮细胞。
【关键词】：绵羊 锌 睾丸 附睾 Zips表达
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S826.5
【目录】：

• 摘要7-9
• 1 综述9-15
• 1.1 锌的生物学功能9-11
• 1.1.1 锌对动物生长发育的影响9
• 1.1.2 锌对免疫机能的影响9-10
• 1.1.3 锌的抗氧化10
• 1.1.4 锌对繁殖的影响10-11
• 1.2 锌在饲料中的添加形式11-12
• 1.3 锌在动物机体内消化吸收机制12-13
• 1.4 锌转运蛋白13-15
• 1.4.1 Zip(SLC39A)家族13-14
• 1.4.2 ZnT(SLC30A)家族14-15
• 2 引言15-16
• 3 材料与方法16-23
• 3.1 试验动物与处理16
• 3.2 饲料配制与饲养管理16-17
• 3.3 样品采集17-18
• 3.4 试验仪器18-19
• 3.5 试验试剂19-20
• 3.6 试验方法20-23
• 3.6.1 引物设计20
• 3.6.2 总RNA提取20
• 3.6.3 总RNA浓度及完整性20-21
• 3.6.4 cDNA合成21
• 3.6.5 常规RT-PCR检测21
• 3.6.6 QRT-PCR检测21
• 3.6.7 Western blotting分析21-22
• 3.6.8 免疫组化分析22-23
• 3.7 数据处理23
• 4 试验结果23-37
• 4.1 RNA检测结果23-24
• 4.2 PCR产物测序结果24-25
• 4.3 荧光定量结果25-30
• 4.3.1 标准曲线的建立25-26
• 4.3.2 睾丸和附睾中Zip1 mRNA表达量26-27
• 4.3.3 睾丸和附睾中Zip3 mRNA表达量27-28
• 4.3.4 睾丸和附睾中Zip6 mRNA表达量28-29
• 4.3.5 睾丸和附睾中Zip8 mRNA表达量29-30
• 4.4 睾丸和附睾中Zip6的蛋白表达量30-32
• 4.5 睾丸和附睾中Zip6的免疫组化结果32-37
• 5 分析与讨论37-40
• 5.1 饲粮不同锌水平对绵羊睾丸、附睾中锌转运蛋白Zips mRNA表达影响37-39
• 5.2 不同锌水平对绵羊睾丸、附睾组织Zip6蛋白表达的影响39-40
• 5.3 不同锌水平组对睾丸和附睾组织中Zip6免疫组化结果的影响40
• 6 结论40-41
• 参考文献41-45
• Abstract45-47
• 致谢47

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1 夏龙钢;日粮添加锌对绵羊睾丸、附睾锌转运蛋白Zips表达的影响[D];山西农业大学;2016年

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