非洲猪瘟病毒MGF505-5R蛋白表达与纯化
发布时间：2021-11-12 00:53
为了获得具有生物学活性的非洲猪瘟病毒（ASFV）MGF505-5R蛋白及其特异性多克隆抗体,分别将His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段与MGF505-5R基因连接,构建原核表达载体pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R、pET28a-GST-MGF505-5R、pET28a-MBP-MGF505-5R和pET28a-NusA-MGF505-5R,并分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化,研究最佳表达条件;采用麦芽糖亲和层析和Ni2+亲和层析对表达的重组蛋白进行纯化,并将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体;应用Western blot方法对制备的多克隆抗体进行鉴定。结果显示,MBP-MGF505-5R重组蛋白能够在大肠杆菌中可溶性表达,在20℃条件下,IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导12 h时,重组蛋白可溶性表达量最高;纯化后可获得纯度达90%以上的MGF505-5R蛋白。...
【文章来源】：河南农业科学. 2020,49(10)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
MGF505-5R基因的PCR扩增结果
5种融合标签基因PCR扩增结果
对MBP-MGF505-5R重组蛋白的表达条件进行了优化,即在20 ℃条件下,设置IPTG浓度梯度:0.2、0.5、0.8 mmol/L,分别诱导8 h和12 h取样检测分析MBP-MGF505-5R重组蛋白可溶性表达水平。从图4可以看出,当IPTG浓度为0.5 mmol/L时,MBP-MGF505-5R重组蛋白可溶性表达量最高,但是进一步增加诱导剂浓度到0.8 mmol/L时,MBP-MGF505-5R重组蛋白可溶性表达水平下降,说明最适诱导剂浓度为0.5 mmol/L。在IPTG浓度为0.5 mmol/L的诱导条件下,诱导时间增加,MBP-MGF505-5R重组蛋白的可溶性表达量提高。图4 MBP-MGF505-5R重组蛋白诱导表达条件优化结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白亲和肽的原核表达及其病毒亲和性分析[J]. 于天飞,董慧莹,谢鹏宇,孙婉姝,尹海畅,黎明,于志丹. 华北农学报. 2019(05)
[2]非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性[J]. 张艳艳,陈腾,张静远,齐宇,缪发明,薄宗义,王立冬,郭晓宇,周鑫韬,杨金梅,王晓虎,高玉龙,汪春雨,鲍晨沂,米立娟,孙雪霏,冯娜,杨金金,王承宇,万忠海,李记平,孟轲音,田多,李楠,王述超,王颖,张菲,张锦霞,蒋依倩,刘晔,张守峰,张中洋,钱莺娟,朱鸿飞,高玉伟,陈鸿军,李金祥,扈荣良. 中国兽医学报. 2019(08)
[3]O型口蹄疫病毒VP0和VP1蛋白的可溶性表达与反应原性分析[J]. 赵宝磊,刘运超,陈玉梅,姬鹏超,王聚财,刘畅,杨素珍,张改平. 河南农业科学. 2017(02)
[4]口蹄疫病毒VP1蛋白可溶性表达标签筛选[J]. 舒静超,李赛赛,申欢欢,郭豫杰. 河南农业科学. 2016(09)
硕士论文
[1]非洲猪瘟病毒免疫抑制基因的筛选及RPA检测方法的初步建立[D]. 吴映彤.中国农业科学院 2019
本文编号：3489877
【文章来源】：河南农业科学. 2020,49(10)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
MGF505-5R基因的PCR扩增结果
5种融合标签基因PCR扩增结果
对MBP-MGF505-5R重组蛋白的表达条件进行了优化,即在20 ℃条件下,设置IPTG浓度梯度:0.2、0.5、0.8 mmol/L,分别诱导8 h和12 h取样检测分析MBP-MGF505-5R重组蛋白可溶性表达水平。从图4可以看出,当IPTG浓度为0.5 mmol/L时,MBP-MGF505-5R重组蛋白可溶性表达量最高,但是进一步增加诱导剂浓度到0.8 mmol/L时,MBP-MGF505-5R重组蛋白可溶性表达水平下降,说明最适诱导剂浓度为0.5 mmol/L。在IPTG浓度为0.5 mmol/L的诱导条件下,诱导时间增加,MBP-MGF505-5R重组蛋白的可溶性表达量提高。图4 MBP-MGF505-5R重组蛋白诱导表达条件优化结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白亲和肽的原核表达及其病毒亲和性分析[J]. 于天飞,董慧莹,谢鹏宇,孙婉姝,尹海畅,黎明,于志丹. 华北农学报. 2019(05)
[2]非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性[J]. 张艳艳,陈腾,张静远,齐宇,缪发明,薄宗义,王立冬,郭晓宇,周鑫韬,杨金梅,王晓虎,高玉龙,汪春雨,鲍晨沂,米立娟,孙雪霏,冯娜,杨金金,王承宇,万忠海,李记平,孟轲音,田多,李楠,王述超,王颖,张菲,张锦霞,蒋依倩,刘晔,张守峰,张中洋,钱莺娟,朱鸿飞,高玉伟,陈鸿军,李金祥,扈荣良. 中国兽医学报. 2019(08)
[3]O型口蹄疫病毒VP0和VP1蛋白的可溶性表达与反应原性分析[J]. 赵宝磊,刘运超,陈玉梅,姬鹏超,王聚财,刘畅,杨素珍,张改平. 河南农业科学. 2017(02)
[4]口蹄疫病毒VP1蛋白可溶性表达标签筛选[J]. 舒静超,李赛赛,申欢欢,郭豫杰. 河南农业科学. 2016(09)
硕士论文
[1]非洲猪瘟病毒免疫抑制基因的筛选及RPA检测方法的初步建立[D]. 吴映彤.中国农业科学院 2019
本文编号：3489877
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