猪病毒性腹泻病相关病原的MLPA检测技术的建立及应用

发布时间：2021-11-13 02:13

　　每年冬春季爆发于规模化养猪场的腹泻常由不同病毒引起,临床表现为相似腹泻症状。为了区分临床腹泻样本中的病毒性病原体,迫切需求建立一种快速同时检测常见6种病毒性腹泻疾病的病原技术。本研究针对猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）S基因、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus, TGEV）N基因、猪Delta冠状病毒（Porcine delta coronavirus, PDCoV）N基因、猪博卡病毒（Porcine bocavirus, pBCaV）NS1基因、猪诺如病毒（Porcine norovirus, pNoV）RdRp基因、猪轮状病毒（Porcine rotavirus, pRV）NSP1基因的核酸保守区域,设计多重连接探针扩增技术（multiplex ligationdependent probe amplification, MLPA）探针和预扩增引物,利用MLPA技术和毛细管电泳技术,建立检测6种疾病病原核酸的检测方法。结果表明,单一探针检测混合模板,显示出高度特异性... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(09)北大核心CSCD

【文章页数】：12 页

【部分图文】：

6种病毒目的基因PCR扩增

混合探针的浓度优化峰图(A)及胶图(B)

将pBCaV、pNoV、PDCoV、PEDV、pRV和TGEV阳性质粒混合后，分别按照1×107、1×106、1×105copies/μL稀释，按照1.2.6方法进行组内和组间重复性实验。结果显示：组内实验的每一种疾病同一浓度的变异系数都低于3%，组间实验结果显示不同批次、每一种疾病同一个浓度的变异系数都低于2%(表4)。图4 混合探针的特异性分析峰图(A)及胶图(B)

【参考文献】：
期刊论文
[1]2013～2018年广西部分规模猪场主要病毒性腹泻疫病流行病学调查研究[J]. 何颖,秦毅斌,段群棚,张艺杰,卢冰霞,胡庭俊,李晓玉,周英宁,周展宏,刘磊,梁家幸,李斌,蒋冬福,卢敬专,苏乾莲,刘棋,赵武.  中国动物传染病学报. 2019(03)
[2]猪猝死症4种重要病原多重连接探针扩增鉴别检测技术的建立与应用[J]. 周莹珊,陈琳,孙静,姜胜,邵春艳,周彬,宋泉江,黄保续,王晓杜,宋厚辉.  中国预防兽医学报. 2019(02)
[3]多重连接探针扩增对5种牛病毒同步检测方法的建立[J]. 史喜菊,马贵平,柏亚铎,郝俊虎,乔彩霞,刘全国,李炎鑫,李冰玲.  中国兽医学报. 2017(02)
[4]贵州省仔猪病毒性腹泻病原学调查[J]. 张双翔,胡兴义,唐宇,冉隆仲,李涛,王慧.  贵州畜牧兽医. 2016(06)
[5]多重连接探针扩增（MLPA）技术同时检测五种病毒的研究[J]. 史喜菊,马贵平,乔彩霞,郭志红,张伟,刘全国,李炎鑫,李冰玲.  农业生物技术学报. 2013(06)



本文编号：3492103