ATDC5细胞系增殖分化各阶段标志物表达差异的比较
发布时间：2021-11-14 22:28
软骨损伤是一种临床常见病,包括磨损与老年后发生的退行性病变,由于软骨内缺乏血管、神经等组织,导致软骨一旦损伤,则很难修复。ATDC5是一种重要的软骨细胞模型,已经被广泛地应用于软骨细胞增殖分化等方面的研究,但关于ATDC5细胞在各增殖与分化阶段标志物如何变化方面的研究较少。因此,为了阐明ATDC5细胞系是否具有与软骨细胞相似的静息期、增殖期、肥大期和钙化期的分期特性,本实验通过对不同培养天数ATDC5细胞标志物的检测,确定软骨细胞分化各阶段相关标志性基因与蛋白差异表达情况,明确该细胞系的增殖分化阶段划分。确定ATDC5细胞是否可以模拟软骨细胞某一时期的增殖分化过程,为进一步采用ATDC5细胞进行相关实验研究提供一个参考依据。以ATDC5细胞作为软骨细胞的体外模型,接种于FBS浓度为5%的DMEM/F12（1:1）的细胞瓶内,待细胞长至50%后,加入1%ITS诱导分化,离体培养21天（d）,分别在4 d、7 d、14 d、21 d四个时间点,检测软骨细胞增殖分化阶段的标志性因子的表达情况。从细胞水平,明确ATDC5细胞的细胞增殖、活性及形态学变化;对ATDC5细胞进行阿利新兰及茜素红-S...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ALP检测路线图及相关试剂的配备
图 3-2A RNA 完整性检测结果及 DNA 验证结果ure 3-2A RNA integrity test results and DNA verification results及蛋白多糖生成的趋势体外培养的环境下，在保持软骨细胞分化特性的前提下迅速
注：箭头所指向软骨结节，圆圈向钙化斑。Note: Arrowhead refers to a cartilaginous nodule, circle refers to a cartilaginous knot.图 3-3 相差显微镜下观察的 ATDC5 细胞培养 4 d、7 d、14 d 和 21 d 的增殖分化状态Figure 3-3 Proliferation and differentiation status of ATDC5 cells cultured for 4 day, 7 day, 14 dayand 21 day under phase contrast microscope3.4 ALP 活性的检测ALP 活性可以作为软骨细胞发生矿化的标记，软骨细胞中 ALP 活性的诱导与发生矿化的肥大软骨细胞中基质小泡的分化和积累有关。为了检测 ATDC5 细胞的矿化程度，使用 PNPP检测法对 ALP 活性进行检测，如图 3-5 所示，细胞培养至 7 d，ALP 活性无明显变化（P>0.05），继续培养至 14 d，ALP 活性显著上升（P<0.001），直至 21 d 虽有下降趋势，但差异不显著。
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织工程化关节软骨研究进展[J]. 来灿钢,张泽宇,李青,俞燕飞,厉驹. 中国医疗器械信息. 2016(19)
[2]软骨组织工程软骨细胞分离方式的优化[J]. 邵博,占琼,龚忠诚,宁晓婷,杨萌,王玥,胡鑫,高芸竹,林兆全. 新疆医科大学学报. 2016(09)
[3]抑制Runx2的表达增强BMP2诱导的干细胞成软骨分化[J]. 孙泽绪,赵辰,廖军义,王琦,徐伟,陈诚,黄伟. 中国生物工程杂志. 2016(04)
[4]骨形成蛋白-7对多孔钽/软骨细胞复合物分泌功能以及Col-Ⅱ、AGG和Sox9基因表达的影响[J]. 张辉,李亮,王茜,甘洪全,王辉,毕成,李琪佳,王志强. 北京大学学报(医学版). 2015(02)
[5]蛋白聚糖酶和骨关节炎[J]. 李超,曹永平,关振鹏,黄德勇,葛子钢. 北京大学学报(医学版). 2009(05)
[6]基质金属蛋白酶家族在骨关节炎软骨组织中表达的研究[J]. 王玉彬,陈安民,郭风劲,夏玉军. 中国矫形外科杂志. 2007(11)
[7]成骨细胞和Ⅰ型胶原[J]. 王海彬,何伟,袁浩. 中国中医骨伤科杂志. 2003(03)
[8]关节软骨胶原变化与骨关节炎的关系[J]. 陈崇伟,卫小春. 中华风湿病学杂志. 2003(01)
[9]骨基质Ⅰ型胶原的增龄性改变[J]. 高林峰,王洪复. 中华老年医学杂志. 2001(06)
[10]正常关节软骨的胶原表型与骨关节炎关节软骨的表型异常[J]. 邓廉夫. 国外医学(创伤与外科基本问题分册). 1996(03)
博士论文
[1]MAPK家族在成骨细胞分化过程中调控作用的研究[D]. 赵良功.兰州大学 2015
[2]骨关节炎软骨细胞表型异常分子机制的蛋白组学研究[D]. 肖军.中国协和医科大学 2008
本文编号：3495469
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ALP检测路线图及相关试剂的配备
图 3-2A RNA 完整性检测结果及 DNA 验证结果ure 3-2A RNA integrity test results and DNA verification results及蛋白多糖生成的趋势体外培养的环境下，在保持软骨细胞分化特性的前提下迅速
注：箭头所指向软骨结节，圆圈向钙化斑。Note: Arrowhead refers to a cartilaginous nodule, circle refers to a cartilaginous knot.图 3-3 相差显微镜下观察的 ATDC5 细胞培养 4 d、7 d、14 d 和 21 d 的增殖分化状态Figure 3-3 Proliferation and differentiation status of ATDC5 cells cultured for 4 day, 7 day, 14 dayand 21 day under phase contrast microscope3.4 ALP 活性的检测ALP 活性可以作为软骨细胞发生矿化的标记，软骨细胞中 ALP 活性的诱导与发生矿化的肥大软骨细胞中基质小泡的分化和积累有关。为了检测 ATDC5 细胞的矿化程度，使用 PNPP检测法对 ALP 活性进行检测，如图 3-5 所示，细胞培养至 7 d，ALP 活性无明显变化（P>0.05），继续培养至 14 d，ALP 活性显著上升（P<0.001），直至 21 d 虽有下降趋势，但差异不显著。
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织工程化关节软骨研究进展[J]. 来灿钢,张泽宇,李青,俞燕飞,厉驹. 中国医疗器械信息. 2016(19)
[2]软骨组织工程软骨细胞分离方式的优化[J]. 邵博,占琼,龚忠诚,宁晓婷,杨萌,王玥,胡鑫,高芸竹,林兆全. 新疆医科大学学报. 2016(09)
[3]抑制Runx2的表达增强BMP2诱导的干细胞成软骨分化[J]. 孙泽绪,赵辰,廖军义,王琦,徐伟,陈诚,黄伟. 中国生物工程杂志. 2016(04)
[4]骨形成蛋白-7对多孔钽/软骨细胞复合物分泌功能以及Col-Ⅱ、AGG和Sox9基因表达的影响[J]. 张辉,李亮,王茜,甘洪全,王辉,毕成,李琪佳,王志强. 北京大学学报(医学版). 2015(02)
[5]蛋白聚糖酶和骨关节炎[J]. 李超,曹永平,关振鹏,黄德勇,葛子钢. 北京大学学报(医学版). 2009(05)
[6]基质金属蛋白酶家族在骨关节炎软骨组织中表达的研究[J]. 王玉彬,陈安民,郭风劲,夏玉军. 中国矫形外科杂志. 2007(11)
[7]成骨细胞和Ⅰ型胶原[J]. 王海彬,何伟,袁浩. 中国中医骨伤科杂志. 2003(03)
[8]关节软骨胶原变化与骨关节炎的关系[J]. 陈崇伟,卫小春. 中华风湿病学杂志. 2003(01)
[9]骨基质Ⅰ型胶原的增龄性改变[J]. 高林峰,王洪复. 中华老年医学杂志. 2001(06)
[10]正常关节软骨的胶原表型与骨关节炎关节软骨的表型异常[J]. 邓廉夫. 国外医学(创伤与外科基本问题分册). 1996(03)
博士论文
[1]MAPK家族在成骨细胞分化过程中调控作用的研究[D]. 赵良功.兰州大学 2015
[2]骨关节炎软骨细胞表型异常分子机制的蛋白组学研究[D]. 肖军.中国协和医科大学 2008
本文编号：3495469
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