荣昌猪、长白猪免疫相关基因FKBP5的克

发布时间：2021-11-15 10:38

　　本实验用RACE、qPCR、Western Blot、基因克隆、测序、表达蛋白等方法,克隆了荣昌猪、长白猪FKBP5基因cDNA全长、构建了FKBP5组织表达谱、表达纯化了FKBP5蛋白,得到了如下结果：1、利用3’,5’末端快速扩增法（Rapid Amplification of cDNA Ends techniques, RACE）从荣昌猪和长白猪胸腺组织中首次克隆出荣昌猪、长白猪FKBP5基因。荣昌猪FKBP5基因cDNA全长为4119 bp, CDS区长为1374 bp,编码458个氨基酸的多肽,在5’端和3’端分别含有212bp和2533bp的非编码区；长白猪FKBP5基因cDNA全长为4164bp, CDS区长为1374bp,编码458个氨基酸的多肽,在5’端和3’端分别含有255bp和2535bp的非编码区。2、运用qPCR和Western Blot技术检测了该基因在荣昌猪和长白猪不同组织中的mRNA和蛋白表达谱,并且分析了FKBP5 mRNA在荣昌猪和长白猪各组织中的表达差异。研究结果表明,在所检测的组织中,心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、肌肉、性腺、胸腺中均有FKBP5基... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 文献综述
    1.1 FKBPs家族概述
    1.2 FKBPs分子结构和功能
        1.2.1 FKBPs分子结构
        1.2.2 FKBPs功能
    1.3 FKBP5的分子结构、组织分布与功能
        1.3.1 FKBP5的分子结构
        1.3.2 FKBP5的组织分布
        1.3.3 FKBP5功能
2 研究的目的与意义
3 材料和方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 样品采集
    3.2 主要仪器设备
    3.3 主要试剂盒
    3.4 主要试剂及酶
    3.5 载体、菌株和细胞
    3.6 实验室常规实验方法及原理
        3.6.1 总RNA提取
        3.6.2 SMART-RACE-PCR技术
        3.6.3 PCR扩增技术
        3.6.4 琼脂糖电泳及胶回收
        3.6.5 目的片段连接与转化
            3.6.5.1 目的片段与19 Simple T vector连接(TAKARA)
            3.6.5.2 连接产物转化及阳性克隆筛选
        3.6.6 基因序列分析
        3.6.7 RT-PCR及荧光定量PCR
        3.6.8 Western Blot(免疫印迹)技术
        3.6.9 FKBP5蛋白原核表达和纯化
        3.6.10 FKBP5蛋白磷酸酶活性分析
4 结果与分析
    4.1 FKBP5基因的克隆，序列及序列同源性分析
        4.1.1 Total RNA质量鉴定
        4.1.2 SMART cDNA的合成
        4.1.3 FKBP5基因的克隆,序列及序列同源性分析
    4.2 FKBP5基因组织表达谱
        4.2.1 FKBP5 mRNA组织表达谱
        4.2.2 荣昌猪、长白猪FKBP5基因表达差异
        4.2.3 FKBP5蛋白表达谱
    4.3 FKBP5蛋白原核表达
        4.3.1 FKBP5原核表达载体构建
        4.3.2 FKBP5蛋白诱导表达
        4.3.3 FKBP5蛋白鉴定
        4.3.4 诱导FKBP5蛋白表达诱导剂浓度、诱导时间
        4.3.5 FKBP5蛋白分离纯化
        4.3.6 FKBP5蛋白磷酸酶活性分析
5 讨论
    5.1 FKBP5基因的克隆，序列及序列同源性分析
    5.2 FKBP5基因组织表达谱
    5.3 FKBP5蛋白原核表达
6 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]人Hexastatin基因的优化、蛋白的表达纯化及初步应用[J]. 唐晓,宋娜玲,贺欣,王月英,刘谦,温镭,王德芝,韩英,张恒.  国际生物医学工程杂志. 2012 (02)
[2]猪抗病育种候选基因研究进展[J]. 袁树楷,王金勇,谢和芳,李琴,白小青.  中国畜牧杂志. 2007(15)
[3]FKBPs的研究进展[J]. 陈鹏,陈崇宏,程元荣.  海峡药学. 2004(03)
[4]半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件[J]. 陈卫,葛佳佳,张灏,丁霄霖.  无锡轻工大学学报. 2002(05)



本文编号：3496613