猪细胞程序性坏死调节蛋白MLKL的表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2021-11-15 11:05

　　为了获得可用于实际生产检测的抗混合系列蛋白激酶样结构域（MLKL）多克隆抗体,试验采用原核表达的方法进行了MLKL蛋白的制备,又通过免疫小鼠获得了抗MLKL的多克隆抗体,最后利用Western-blot检测验证脂多糖（LPS）刺激猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）中MLKL蛋白。结果表明:MLKL蛋白可以和制备的多克隆抗体发生特异性免疫反应。说明了制备的多克隆抗体具有良好的反应原性,可以用于检测。 

【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(13)北大核心

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【部分图文】：

MLKL的PCR扩增结果

将验证正确的PCR扩增产物与pMD18-T Vector进行连接,得到重组质粒MLKL-pMD-18T Vector。将重组质粒经BamH1/Sal1限制性内切酶双酶切,目的碱基片段的大小为 1 434 bp,再将验证正确的目的碱基片段与pPROEX-HTa载体连接,构建原核基因表达载体。双酶切结果见图2。2.3 MLKL蛋白诱导表达的鉴定

将原核基因表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞BL21,经终浓度为1.0 mmol/LIPTG诱导4 h后,取菌液进行离心获得沉淀。将沉淀用PBS悬浮后用SDS-PAGE上样缓冲液处理蛋白质样品。将样品通过SDS-PAGE电泳鉴定蛋白质表达情况。结果显示MLKL蛋白表达产物在55 ku左右出现条带,与预期一致。结果见图3。2.4 MLKL蛋白的表达纯化

【参考文献】：
硕士论文
[1]miR-200a-5p介导RNF11调控鸡心肌缺硒性程序性坏死的研究[D]. 杨天殊.东北农业大学 2018



本文编号：3496653