猪睾丸组织的miRNA表达谱分析

发布时间：2021-11-19 18:59

　　MicroRNAs （miRNAs）是一类长约22 nt、单链、高度保守、内源性、非编码的小RNA分子,在真核生物中广泛存在,主要通过与靶基因mRNA3’非编码区互补结合来抑制表达或使其降解,进而在转录后调控基因的表达。研究表明,有大量的miRNA偏向于在睾丸和生殖细胞中表达,并且在性成熟前与性成熟睾丸中的表达模式也不同,这也暗示了miRNA在睾丸和生殖细胞中的重要作用。同时,猪也是一种重要的农业经济动物和医学研究模型,并且高通量测序技术可以准确、快速、批量地检测样本的miRNA,所以,选择用高通量测序的技术分析猪睾丸组织性成熟前后的miRNA表达谱并比较分析,以探究miRNA在睾丸发育和生精调控中的重要作用,揭示miRNA在哺乳动物生精过程中的调控机制和促进不育的治疗。于是,本实验利用高通量测序的技术,分别构建了性成熟前和性成熟两个不同时期的猪睾丸组织的miRNAs表达谱,分析不同时期miRNA表达谱的特点并进行比较,主要研究结果如下：1.用高通量测序的方法,本实验成功构建了猪性成熟前（20天）和性成熟（210天）睾丸组织的miRNA表达谱,共获得了超过20M的高质量的序列（read... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
1 文献综述
    1.1 miRNA研究进展
        1.1.1 miRNA的发现
        1.1.2 miRNA的生物合成
        1.1.3 miRNA作用机制
        1.1.4 miRNA研究方法
    1.2 哺乳动物生殖发生与miRNA研究现状
        1.2.1 哺乳动物的精子发生过程
        1.2.2 miRNA与精子发生
        1.2.3 睾丸组织中miRNA的表达
    1.3 实时荧光定量PCR(RT-PCR)
        1.3.1 实时荧光定量PCR的技术原理
        1.3.2 荧光定量PCR的定量方法
        1.3.3 miRNA荧光定量PCR
    1.4 本实验研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 试验时间与地点
    2.3 主要仪器
    2.4 主要试剂
    2.5 RNA的制备
        2.5.1 RNA提取主要步骤
        2.5.2 RNA质量检测
    2.6. 小RNA建库测序
    2.7 测序数据的处理
        2.7.1 测序数据过滤与定位比对
        2.7.2 测序数据的分类
    2.8 差异分析
    2.9 Q-PCR验证
        2.9.1 cDNA的制备
        2.9.2 Real-time PCR
    2.10 靶基因的预测和功能分析
    2.11 数据库及分析软件
3 结果与分析
    3.1 RNA质检结果
    3.2 高通量数据结果
    3.3 猪睾丸组织的miRNA转录组的鉴别和特征
    3.4 猪睾丸组织中高表达的miRNAs
    3.5 猪睾丸组织中差异表达的miRNA
    3.6 靶基因预测和功能分析
    3.7 miRNA的染色体分布
4 讨论
    4.1 高通量的高检测率
    4.2 高表达的miRNAs具有显著调控作用
    4.3 差异表达的miRNA参与调控生精过程
    4.4 miRNA的X染色体趋向性表达
5 结论
参考文献
致谢
附录
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]IL-6调节miR-21在激素抵抗性前列腺癌中的机制研究[J]. 李金贵,马利,熊兵红,程勇,张才全.  西部医学. 2013(10)
[2]利用种子序列检测山羊皮肤中microRNA靶基因分子方法的建立[J]. 付绍印,赵德超,赵宏丽,李金泉,张文广.  遗传. 2012(07)
[3]ERK MAPK是annexin 5调节大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的重要途径[J]. 张稳,陶晓倩,林钗英,柳海燕,时姗姗,戈一峰.  临床检验杂志. 2010(06)
[4]促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达[J]. 柳海燕,时姗姗,陶晓倩,卢坤刚,韩雪峰,张艳梅,崔英霞,李晓军,姚兵.  医学研究生学报. 2009(08)
[5]microRNA表达检测技术进展[J]. 张宇,张勇,杨长成,王振宁.  新乡医学院学报. 2008(06)



本文编号：3505662