miR-33a靶向Lipin1和IRS2调节绵羊前体脂肪细胞分化的研究

发布时间：2021-11-20 00:35

　　旨在揭示miR-33a在绵羊前体脂肪细胞分化中的生物学功能。本研究以15日龄雄性绵羊背部皮下前体脂肪细胞为试验材料,所有的试验均设立3个重复;利用生物信息学软件预测miR-33a的靶基因,并通过双荧光素酶报告试验对预测的潜在靶基因进行验证;用qPCR和Western blotting分别检测miR-33a、Lipin1和IRS2及其编码蛋白的表达,以揭示miR-33a与其靶基因在绵羊前体脂肪细胞分化中的表达规律;慢病毒介导实现miR-33a的过表达和干扰后,检测Lipin1、IRS2和成脂标志基因的表达,并用油红O染色检测脂滴沉积能力,以解析miR-33a对其靶基因的调节机制。生物信息学分析发现,miR-33a与Lipin1和IRS2 3′-UTR都存在结合位点,miR-33a显著下调Lipin1和IRS2野生型双荧光质粒的相对荧光活性（P<0.05）;在绵羊前体脂肪细胞分化中,miR-33a与Lipin1和IRS2的表达趋势相反;过表达miR-33a后,显著下调了Lipin1（P<0.01）和IRS2（P<0.05）及其编码蛋白以及成脂标志基因的表达;干扰miR-3... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(04)北大核心CSCD

【文章页数】：12 页

【部分图文】：

体外培养的绵羊前体脂肪细胞

预测发现,miR-33a的种子区序列(UGCAUUG)在Lipin1 CDS(911～916 nt)和3′-UTR(679～684 nt和1 469～1 474 nt)存在3个结合位点,在IRS2 3′-UTR(994～1 000 nt和1 532～1 538 nt)存在2个结合位点(图3)。我们分别构建了含Lipin1 3′-UTR(679～684 nt)和IRS2 3′-UTR(1 532～1 538 nt)序列的双荧光素酶载体验证靶标关系。图3 miR-33a与Lipin1和IRS2 mRNA预测的结合位点

图2 绵羊前体脂肪细胞分化过程中miR-33a、Lipin1和IRS2 mRNA和蛋白的表达趋势荧光活性检测结果表明,空载体组与其对照的荧光活性差异不显著,Lipin1和IRS2野生型组的荧光活性显著低于各自对照(P<0.05),但Lipin1和IRS2突变组与其对照的荧光活性差异不显著(图4)。说明,miR-33a在Lipin1和IRS2 3′-UTR存在结合位点,Lipin1和IRS2是miR-33a的靶基因。

【参考文献】：
期刊论文
[1]牛前体脂肪细胞的分离培养及诱导分化[J]. 郭红芳,昝林森,孙永刚.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(02)
[2]绵羊LPIN1基因的克隆和mRNA表达研究[J]. 魏琳琳,高晋生,王景霖,程俐芬,乔利英,贾夏丽,张静,杨凯捷,刘建华,梁琛,刘文忠.  畜牧兽医学报. 2013(09)



本文编号：3506205