猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其基因组测序分析
发布时间：2021-11-20 00:59
猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是有囊膜的单链正向RNA病毒,是一种急性高度传染性肠道疾病的病原体,导致哺乳仔猪死亡率很高。PEDV在小肠上皮细胞复制导致绒毛萎缩,吸收不良和严重腹泻。PEDV侵染宿主细胞是由病毒纤突糖蛋白（S）介导的,病毒附着于靶细胞并进行膜融合而进入细胞。PEDV体外增殖需要胰蛋白酶的存在,胰蛋白酶水解蛋白活性导致S蛋白切割成S1和S2亚基,使病毒与细胞间的融合增强,并增加病毒的感染力,在感染的细胞中复制进而释放。在本项研究中,病料采集于中国黑龙江省哈尔滨市某猪场疑似感染PEDV病例。将小肠样品制作病理组织切片,观察到肠绒毛萎缩,上皮细胞空泡变性,固有层充血和炎性细胞浸润。RT-PCR鉴定确定没有混入轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒感染后,对小肠样品进行无菌处理并在猪小肠上皮细胞（Porcine small intestinal epithelial cell,IPEC-J2）上进行盲传培养,IPEC-J2细胞是从新生仔猪中段空肠内分离得到未分化的柱状上皮细胞,更好的模拟肠道环境,当传至第5代时出现典型细胞病变...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HE染色的小肠组织切片
2 000 DNA 分子量标准；1：水对照；2：PEDV PCM: DL2 000; 1: H2O Control; 2: PCR products of PED图 3-4 细胞上清液 RT-PCR 的电泳结果4 Cellular supernatant electrophoresis results b
图 3-7 HLJ 分离株在 IPEC-J2 细胞上的生长曲线Fig. 3-7 The growth curve of HLJ strain in IPEC-J2 ceJ 株全基因组 RT-PCR 分段扩增基因组 5’端利用 5’RACE 试剂盒对基因组的末端片段进
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒流行毒株的分离与鉴定[J]. 周书亭,谢洋洋,丁思嘉,郑煜名,蔡雨豪,罗依然,袁聪俐,杨志彪. 中国兽医科学. 2017(08)
[2]猪流行性腹泻病毒陕西HZ株的分离与鉴定[J]. 庞文静,付明哲,许信刚,郭抗抗,张琪. 动物医学进展. 2017(07)
[3]2011—2015年我国南方地区PEDV分子流行病学调查及S基因遗传变异分析[J]. 李智丽,黄淑坚,马静云,毕英佐. 广东农业科学. 2016(11)
[4]猪流行性腹泻的实验室诊断方法与疫苗研究进展[J]. 马子贵,鲍玉芳,何召庆. 兽医导刊. 2015(13)
[5]猪流行性腹泻病毒的分离与鉴定[J]. 李亚龙,黄岩,吴艳丽,李静姬. 黑龙江畜牧兽医. 2015(09)
[6]双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV[J]. 李一经,刘博,姜艳平,崔文,唐丽杰,乔薪瑗,刘敏. 东北农业大学学报. 2015(02)
[7]PEDV、TGEV、RV多重RT-PCR检测方法的建立与应用[J]. 徐引弟,张青娴,李建林,张彬,王克领,朱文豪. 中国兽药杂志. 2014(11)
[8]猪流行性腹泻病毒S基因研究进展[J]. 陈弟诗,任玉鹏,张斌,李丽,聂艳如,周莉媛. 动物医学进展. 2014(07)
[9]猪流行性腹泻病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鉴别诊断方法的建立[J]. 李长龙,陈建飞,张鑫,时洪艳,冯力. 中国兽医杂志. 2014(06)
[10]猪流行性腹泻的病毒分离鉴定与免疫试验[J]. 王林锋,刘宝元,郝常宝. 科学种养. 2014(06)
博士论文
[1]河南省猪流行性腹泻病毒遗传进化分析及免疫学检测方法的建立[D]. 李任峰.西北农林科技大学 2016
[2]猪流行性腹泻病毒感染猪小肠上皮细胞抑制IFN-β产生及激活NF-κB机理研究[D]. 曹丽艳.东北农业大学 2015
[3]猪流行性腹泻病毒AJ1102株的分离、鉴定及其分子进化特征[D]. 毕静.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]基于假病毒的猪流行性腹泻病毒S1蛋白细胞定位研究[D]. 丛郢颖.东北农业大学 2014
[2]猪流行性腹泻病毒NJ株的分离与鉴定[D]. 施雯.东北农业大学 2014
[3]猪流行性腹泻病毒特性研究及其种毒制备[D]. 王靓靓.东北农业大学 2013
[4]猪流行性腹泻病毒S1蛋白亲和肽的筛选与鉴定[D]. 杨巍.东北农业大学 2011
[5]猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.东北农业大学 2011
本文编号：3506246
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HE染色的小肠组织切片
2 000 DNA 分子量标准；1：水对照；2：PEDV PCM: DL2 000; 1: H2O Control; 2: PCR products of PED图 3-4 细胞上清液 RT-PCR 的电泳结果4 Cellular supernatant electrophoresis results b
图 3-7 HLJ 分离株在 IPEC-J2 细胞上的生长曲线Fig. 3-7 The growth curve of HLJ strain in IPEC-J2 ceJ 株全基因组 RT-PCR 分段扩增基因组 5’端利用 5’RACE 试剂盒对基因组的末端片段进
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒流行毒株的分离与鉴定[J]. 周书亭,谢洋洋,丁思嘉,郑煜名,蔡雨豪,罗依然,袁聪俐,杨志彪. 中国兽医科学. 2017(08)
[2]猪流行性腹泻病毒陕西HZ株的分离与鉴定[J]. 庞文静,付明哲,许信刚,郭抗抗,张琪. 动物医学进展. 2017(07)
[3]2011—2015年我国南方地区PEDV分子流行病学调查及S基因遗传变异分析[J]. 李智丽,黄淑坚,马静云,毕英佐. 广东农业科学. 2016(11)
[4]猪流行性腹泻的实验室诊断方法与疫苗研究进展[J]. 马子贵,鲍玉芳,何召庆. 兽医导刊. 2015(13)
[5]猪流行性腹泻病毒的分离与鉴定[J]. 李亚龙,黄岩,吴艳丽,李静姬. 黑龙江畜牧兽医. 2015(09)
[6]双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV[J]. 李一经,刘博,姜艳平,崔文,唐丽杰,乔薪瑗,刘敏. 东北农业大学学报. 2015(02)
[7]PEDV、TGEV、RV多重RT-PCR检测方法的建立与应用[J]. 徐引弟,张青娴,李建林,张彬,王克领,朱文豪. 中国兽药杂志. 2014(11)
[8]猪流行性腹泻病毒S基因研究进展[J]. 陈弟诗,任玉鹏,张斌,李丽,聂艳如,周莉媛. 动物医学进展. 2014(07)
[9]猪流行性腹泻病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鉴别诊断方法的建立[J]. 李长龙,陈建飞,张鑫,时洪艳,冯力. 中国兽医杂志. 2014(06)
[10]猪流行性腹泻的病毒分离鉴定与免疫试验[J]. 王林锋,刘宝元,郝常宝. 科学种养. 2014(06)
博士论文
[1]河南省猪流行性腹泻病毒遗传进化分析及免疫学检测方法的建立[D]. 李任峰.西北农林科技大学 2016
[2]猪流行性腹泻病毒感染猪小肠上皮细胞抑制IFN-β产生及激活NF-κB机理研究[D]. 曹丽艳.东北农业大学 2015
[3]猪流行性腹泻病毒AJ1102株的分离、鉴定及其分子进化特征[D]. 毕静.华中农业大学 2013
硕士论文
[1]基于假病毒的猪流行性腹泻病毒S1蛋白细胞定位研究[D]. 丛郢颖.东北农业大学 2014
[2]猪流行性腹泻病毒NJ株的分离与鉴定[D]. 施雯.东北农业大学 2014
[3]猪流行性腹泻病毒特性研究及其种毒制备[D]. 王靓靓.东北农业大学 2013
[4]猪流行性腹泻病毒S1蛋白亲和肽的筛选与鉴定[D]. 杨巍.东北农业大学 2011
[5]猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.东北农业大学 2011
本文编号：3506246
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