奶牛妊娠相关糖蛋白2的表达及结构功能预测分析
发布时间：2021-11-20 18:05
为了获得高效表达纯化并且抗原性较好的牛妊娠相关糖蛋白2（bovine pregnancy-associated glycoprotein 2,BoPAG2）,对该蛋白的结构与功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG2基因,并将该基因连接至表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌（BL21）中诱导表达并纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting验证与检测该蛋白的大小和免疫学特性,通过生物信息学对BoPAG2蛋白的糖基化修饰、B细胞抗原表位、亲水性、信号肽,蛋白二级结构和3D模型、保守结构域以及蛋白互作进行预测分析。结果表明,本研究成功克隆出BoPAG2基因,通过诱导表达并纯化相应蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting验证BoPAG2蛋白的大小与预期结果相符,通过生物信息学预测分析结果显示,BoPAG2蛋白有5个位点发生糖基化修饰,分别为Asp51、Asp71、Asp114、Asp252和Asp343,该蛋白含有15个B细...
【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(10)北大核心
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
BoPAG2基因PCR扩增结果
BoPAG2-pET28a重组质粒经限制性内切酶双酶切后经1.0%琼脂糖凝胶电泳进行检测,得到大小为1 131 bp的目的条带(图2),与预期结果相符,表明BoPAG2基因已成功插入表达载体中。2.3 蛋白的诱导表达与纯化
通过NetNGIyc 1.0 Server在线软件对蛋白进行糖基化修饰位点预测,预测结果如图5所示,BoPAG2在Asp51、Asp71、Asp114、Asp252、Asp343 5个位点发生N-糖基化修饰。使用IEDB在线软件预测分析蛋白线性B细胞抗原表位(图6)和抗原表位序列(表1)结果显示,BoPAG2有17个B细胞抗原表位。通过ProtScale软件对BoPAG2蛋白进行亲水性分析,结果显示,第8位谷氨酸疏水性最强(最高分值为3.2),第50赖氨酸位亲水性最强(最低分值为-2.044)(图7)。通过SignalP 4.1 Server软件预测蛋白信号肽如(图8)所示,BoPAG2在N端前15个氨基酸序列为信号肽序列。通过SOPMA在线软件预测蛋白的二级结构,结果显示,BoPAG2蛋白主要以无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β折叠组成,所占比例分别为41.76%、19.41%、32.98%和5.85%(图9)。图4 BoPAG2蛋白Western blotting结果
【参考文献】：
博士论文
[1]牛IFNτ基因成熟蛋白CDS区的克隆、原核表达及其在妊娠建立过程中的生物学功能研究[D]. 张明.四川农业大学 2007
本文编号：3507859
【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(10)北大核心
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
BoPAG2基因PCR扩增结果
BoPAG2-pET28a重组质粒经限制性内切酶双酶切后经1.0%琼脂糖凝胶电泳进行检测,得到大小为1 131 bp的目的条带(图2),与预期结果相符,表明BoPAG2基因已成功插入表达载体中。2.3 蛋白的诱导表达与纯化
通过NetNGIyc 1.0 Server在线软件对蛋白进行糖基化修饰位点预测,预测结果如图5所示,BoPAG2在Asp51、Asp71、Asp114、Asp252、Asp343 5个位点发生N-糖基化修饰。使用IEDB在线软件预测分析蛋白线性B细胞抗原表位(图6)和抗原表位序列(表1)结果显示,BoPAG2有17个B细胞抗原表位。通过ProtScale软件对BoPAG2蛋白进行亲水性分析,结果显示,第8位谷氨酸疏水性最强(最高分值为3.2),第50赖氨酸位亲水性最强(最低分值为-2.044)(图7)。通过SignalP 4.1 Server软件预测蛋白信号肽如(图8)所示,BoPAG2在N端前15个氨基酸序列为信号肽序列。通过SOPMA在线软件预测蛋白的二级结构,结果显示,BoPAG2蛋白主要以无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β折叠组成,所占比例分别为41.76%、19.41%、32.98%和5.85%(图9)。图4 BoPAG2蛋白Western blotting结果
【参考文献】：
博士论文
[1]牛IFNτ基因成熟蛋白CDS区的克隆、原核表达及其在妊娠建立过程中的生物学功能研究[D]. 张明.四川农业大学 2007
本文编号：3507859
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3507859.html
