PHEV病毒蛋白PLP诱导N2a细胞自噬作用的研究
发布时间：2021-11-20 19:15
猪血凝性脑脊髓炎（porcine hemagglutinating encephalomyelitis,PHE）是由猪血凝性脑脊髓炎病毒（porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV）引起的急性、高度接触性传染病,给我国各地养猪业的发展造成严重威胁。PHEV主要侵害宿主中枢神经系统（CNS）的神经细胞,导致神经系统功能障碍。通常情况下,病毒入侵细胞时会引起细胞的免疫应答反应进而清除病原体以维持细胞稳态。自噬正是一种细胞固有的免疫机制,通过将包含病原体的内含物运送至溶酶体进行降解,进而阻止病原体在胞内复制增殖。然而,人们发现,病毒也能够进化出一些调节机制对抗细胞自噬,并为自身复制提供有利条件。最新研究表明,PHEV能够诱导神经细胞发生不完全自噬进而为自身生存提供便利。木瓜样蛋白酶（Papain-like protease,PLP）是多种病毒复制过程中重要的蛋白酶,有研究表明:SARS、PEDV、HCoV和MERS等冠状病毒均可以通过PLP调控自噬体的形成,引起宿主细胞发生不完全自噬并负向调控抗病毒免疫反应。PHEV同属于冠状病...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
冠状病毒主要结构蛋白示意图
图 1.2 PLP 转染引起自噬相关蛋白 LC3 的变化Fig.1.2 The changes of autophagy-associated protein LC3A .Western blot 检测结果；B.光密度分析变化趋势1.2.3 N2a 细胞中过表达 PLP 后诱导 GFP-LC3B 绿色荧光斑点的形成将 pCMV-Flag-PLP 与 GFP-LC3B 质粒共转染至 N2a 细胞中，用 Rapamycin处理细胞作为阳性对照组。到达时间点后收取样品并进行免疫荧光实验分析，观察绿色荧光蛋白在细胞中呈现的具体分布状态。结果表明，过表达 PLP 蛋白后，N2a 细胞内出现明显的绿色荧光点状聚集（如图 1.3），与 Rapamycin 处理的结果类似，而转染空载体的细胞中 GFP-LC3 呈现明显的弥散状分布，进一步验证了 PLP 能够诱导 N2a 细胞发生自噬。
图 1.2 PLP 转染引起自噬相关蛋白 LC3 的变化Fig.1.2 The changes of autophagy-associated protein LC3A .Western blot 检测结果；B.光密度分析变化趋势N2a 细胞中过表达 PLP 后诱导 GFP-LC3B 绿色荧光斑点的形成pCMV-Flag-PLP 与 GFP-LC3B 质粒共转染至 N2a 细胞中，用 R胞作为阳性对照组。到达时间点后收取样品并进行免疫荧光实验荧光蛋白在细胞中呈现的具体分布状态。结果表明，过表达 PLP胞内出现明显的绿色荧光点状聚集（如图 1.3），与 Rapamycin 处，而转染空载体的细胞中 GFP-LC3 呈现明显的弥散状分布，进一 能够诱导 N2a 细胞发生自噬。
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立[J]. 赵传博,王丽,董波,陆慧君,赵魁,贺文琦,高丰. 中国兽医学报. 2013(04)
[2]SARS冠状病毒PLpro蛋白酶的结构与功能[J]. 杨宇东,孙莉,陈忠斌. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(01)
[3]猪血凝性脑脊髓炎的研究现状[J]. 耿百成,高丰,贺文琦. 中国畜牧兽医. 2005(06)
[4]不同途径感染猪血球凝集性脑脊髓炎病毒的比较病理学[J]. 高丰,丁壮,安铁洙,周学章,邹啸环. 中国兽医学报. 2003(04)
本文编号：3507952
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
冠状病毒主要结构蛋白示意图
图 1.2 PLP 转染引起自噬相关蛋白 LC3 的变化Fig.1.2 The changes of autophagy-associated protein LC3A .Western blot 检测结果；B.光密度分析变化趋势1.2.3 N2a 细胞中过表达 PLP 后诱导 GFP-LC3B 绿色荧光斑点的形成将 pCMV-Flag-PLP 与 GFP-LC3B 质粒共转染至 N2a 细胞中，用 Rapamycin处理细胞作为阳性对照组。到达时间点后收取样品并进行免疫荧光实验分析，观察绿色荧光蛋白在细胞中呈现的具体分布状态。结果表明，过表达 PLP 蛋白后，N2a 细胞内出现明显的绿色荧光点状聚集（如图 1.3），与 Rapamycin 处理的结果类似，而转染空载体的细胞中 GFP-LC3 呈现明显的弥散状分布，进一步验证了 PLP 能够诱导 N2a 细胞发生自噬。
图 1.2 PLP 转染引起自噬相关蛋白 LC3 的变化Fig.1.2 The changes of autophagy-associated protein LC3A .Western blot 检测结果；B.光密度分析变化趋势N2a 细胞中过表达 PLP 后诱导 GFP-LC3B 绿色荧光斑点的形成pCMV-Flag-PLP 与 GFP-LC3B 质粒共转染至 N2a 细胞中，用 R胞作为阳性对照组。到达时间点后收取样品并进行免疫荧光实验荧光蛋白在细胞中呈现的具体分布状态。结果表明，过表达 PLP胞内出现明显的绿色荧光点状聚集（如图 1.3），与 Rapamycin 处，而转染空载体的细胞中 GFP-LC3 呈现明显的弥散状分布，进一 能够诱导 N2a 细胞发生自噬。
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立[J]. 赵传博,王丽,董波,陆慧君,赵魁,贺文琦,高丰. 中国兽医学报. 2013(04)
[2]SARS冠状病毒PLpro蛋白酶的结构与功能[J]. 杨宇东,孙莉,陈忠斌. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(01)
[3]猪血凝性脑脊髓炎的研究现状[J]. 耿百成,高丰,贺文琦. 中国畜牧兽医. 2005(06)
[4]不同途径感染猪血球凝集性脑脊髓炎病毒的比较病理学[J]. 高丰,丁壮,安铁洙,周学章,邹啸环. 中国兽医学报. 2003(04)
本文编号：3507952
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3507952.html
