广西地方品系鸡ALV的分离鉴定和引发急性纤维肉瘤的ALV-J株感染性实验

发布时间：2021-11-21 06:51

　　本研究一方面对广西龙胜凤鸡、三黄鸡等地方品系鸡的祖代、父母代种群进行流行病学调查,开展禽白血病净化研究,将ELISA抗原检测为阳性的个体鸡的无菌血清感染成纤维细胞,提取前病毒DNA,进行核酸扩增和测序。另一方面,将临床上可引起急性纤维肉瘤的ALV-J的组织滤液以腹腔为接种部位感染裸鼠,并将发生急性纤维肉瘤的SPF鸡的新鲜肉瘤组织细胞悬液以腋下为接种部位接种裸鼠,研究缺陷型ALV-J对裸鼠的感染性。通过禽白血病病毒的分离与鉴定,从地方品系龙胜凤鸡和土鸡中各分离到1株B亚群ALV,从三黄鸡中分离到8株J亚群ALV。序列分析结果显示龙胜凤鸡分离株GX-J-15的gp85氨基酸序列与国际上仅发表的4株B亚群代表毒株的同源性在91.7%以上,其中与山东地方品系芦花鸡分离株SDAU09C2的同源性高达98.1%；土鸡分离株GX-J-14的gp85氨基酸序列与5株B亚群代表株的同源性在89%-90%,远高于与其他亚群的同源性。而两个分离株的gp85氨基酸序列与J亚群代表毒株的同源性仅为50%左右；从三黄鸡中分离到的8株J亚群ALV,其gp85氨基酸序列与J亚群ALV参考株的gp85氨基酸序列同源性均... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 禽白血病病毒的特性
    1.1 禽白血病/肉瘤病毒群
        1.1.1 病毒粒子的结构
        1.1.2 病毒粒子的理化特性
        1.1.3 核酸和基因组结构
        1.1.4 蛋白结构
        1.1.5 病毒的流行特点和传播途径
        1.1.6 ALV感染的检测技术
            1.1.6.1 ALV血清学检测方法
            1.1.6.2 ALV的分离与鉴定
            1.1.6.3 ALV核酸检测技术
    1.2 裸鼠的生物学特性及应用
    1.3 本课题的研究目的与意义
第二章 广西地方品系鸡ALV的分离鉴定及分子进化分析
    摘要
    2.1 材料
        2.1.1 病料来源
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 细胞
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 引物
        2.1.6 分子生物学分析软件
    2.2 方法
        2.2.1 成纤维细胞的制备
        2.2.2 病毒的分离
        2.2.3 细胞基因组DNA的抽提
        2.2.4 细胞基因组的PCR鉴定
        2.2.5 病毒env基因的克隆转化与测序
            2.2.5.1 env基因的扩增
            2.2.5.2 PCR产物回收
            2.2.5.3 DNA的连接反应
            2.2.5.4 连接产物的转化
            2.2.5.5 阳性克隆序列测定
        2.2.6 氨基酸序列同源性分析
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 细胞基因组的PCR鉴定结果
            2.3.1.1 龙胜凤鸡和土鸡样品鉴定结果
            2.3.1.2 三黄鸡样品鉴定结果
        2.3.2 病毒env基因的扩增
            2.3.2.1 ALV-B env基因的扩增
            2.3.2.2 ALV-J env基因的扩增
        2.3.3 ALV-B分离株序列同源性分析
            2.3.3.1 gp85基因编码的氨基酸序列同源性分析
            2.3.3.2 gp37基因编码的氨基酸序列同源性分析
            2.3.3.3 3’末端非编码区序列同源性分析
        2.3.4 ALV-J分离株序列同源性分析
            2.3.4.1 gp85基因编码的氨基酸序列同源性分析
            2.3.4.2 gp37基因编码的氨基酸序列同源性分析
            2.3.4.3 3’末端非编码区序列同源性分析
    2.4 小结与讨论
        2.4.1 十个分离毒株的亚群分类
        2.4.2 两个B亚群分离株的gp85变异
        2.4.3 八个J亚群分离株的gp85变异
第三章 致急性纤维肉瘤的缺陷型ALV-J对裸鼠的感染性实验
    摘要
    3.1 材料
        3.1.1 病料来源
        3.1.2 实验动物
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 引物
    3.2 方法
        3.2.1 肉瘤组织研磨滤液对裸鼠的感染
        3.2.2 肉瘤组织研磨滤液对SPF雏鸡的感染
        3.2.3 肉瘤组织细胞悬液对裸鼠的接种
        3.2.4 剖解及病理组织切片观察
        3.2.5 复制完整型病毒与缺陷型病毒前病毒基因组序列的扩增
            3.2.5.1 前病毒DNA的提取
            3.2.5.2 病毒RNA的提取
            3.2.5.3 聚合酶链式反应(PCR)
            3.2.5.4 RT-PCR
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 肉瘤组织研磨滤液对SPF雏鸡的感染
        3.3.2 裸鼠肉眼病变
        3.3.3 病理组织切片观察
        3.3.4 复制完整型病毒与缺陷型病毒前病毒基因组序列的扩增
            3.3.4.1 SD1005前病毒cDNA的核酸扩增
            3.3.4.2 携带有肿瘤基因的病毒嵌合体分子核酸片段的扩增
    3.4 小结与讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间发表的学术论文及参加的科研项目



本文编号：3509002