广西鸭圆环病毒遗传变异分析及Cap蛋白的原核表达

发布时间：2021-11-21 16:12

　　鸭圆环病毒（Duck circovirus, DuCV）主要是侵害宿主的免疫系统,而导致宿主免疫力低下,进而引发二重或多重感染,可给养殖业造成极大经济损失。然而由于DuCV发现较晚,又缺乏体外培养DuCV的方法,因此对其致病机理及危害的研究尚存在很多困难。为了解DuCV在广西鸭群中流行和变异,以及危害程度,明确广西DuCV的基因型及优势基因型,并为创建研制DuCV抗体快速检测方法奠定基础。本研究拟从广西DuCV遗传变异分析及Cap蛋白的原核表达两个部分对广西DuCV进行研究和分析。1、广西DuCV遗传变异分析本研究采取PCR扩增方法对2010～2012年间广西9市鸭群中2569份内脏组织样品进行了检测,检测出阳性样品194份,阳性率为7.55%。其中,筛选部分阳性样品进行基因组扩增和比对分析,共获得14个DuCV全基因组序列。基因组大小为1993nt～1995nt,与已报道的其他DuCV毒株基因组大小一致。14个DuCV广西毒株彼此之间的同源性为93.5%～99.8%,与德国、美国、韩国分离株以及24个中国大陆毒株的同源性为92.2%～99.6%,而与另外18个大陆地区毒株和4个台湾毒... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 DuCV概述
    1.2 DuCV基因组结构
    1.3 DuCV流行情况
    1.4 致病机理
    1.5 诊断方法
    1.6 防控措施
    1.7 研究目的及意义
    1.8 研究目标
    1.9 研究方法及技术路线
第二章 广西鸭群中鸭圆环病毒的遗传变异分析
    2.1 材料
        2.1.1 组织样品
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 样品处理
        2.2.2 病毒DNA提取
        2.2.3 引物的设计与合成
        2.2.4 PCR检测
        2.2.5 PCR产物凝胶电泳
        2.2.6 PCR产物回收
        2.2.7 DNA片段连接
        2.2.8 连接产物的转化
        2.2.9 质粒提取
        2.2.10 重组质粒的鉴定
            2.2.10.1 重组质粒的酶切鉴定
            2.2.10.2 重组质粒的PCR鉴定
            2.2.10.3 重组质粒序列测定
        2.2.11 质粒序列分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 PCR检测结果
        2.3.2 基因序列分析
        2.3.3 基因组序列分析
            2.3.3.1 全基因组序列的分型
            2.3.3.2 ORF C1(Cap基因)序列的基因分型
            2.3.3.3 ORF V1(Rep基因)序列的基因分型
            2.3.3.4 ORF C2序列的基因分型
    2.4 讨论
第三章 鸭圆环病毒Cap蛋白的原核表达
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 主要仪器
    3.2 方法
        3.2.1 目的基因密码子优化
        3.2.2 目的基因片段的回收
        3.2.3 目的片段与表达载体pET-32a的连接
        3.2.4 连接物产物的转化
        3.2.5 重组质粒pET-32a-Cap的提取
        3.2.6 重组质粒的鉴定
        3.2.7 重组质粒的酶切鉴定
        3.2.8 重组质粒的序列测定
        3.2.9 Cap蛋白的诱导表达
        3.2.10 阳性重组质粒pET-32a-Cap的转化
        3.2.11 诱导表达条件的优化
            3.2.11.1 最佳诱导表达时间的确定
            3.2.11.2 最佳表达IPTG浓度的确定
            3.2.11.3 最佳诱导表达温度的确定
        3.2.12 表达形式的检测
        3.2.13 Western blot鉴定
        3.2.14 重组蛋白的纯化
    3.3 结果及分析
        3.3.1 重组质粒pET-32a-Cap鉴定结果
        3.3.2 Cap蛋白的诱导表达条件筛选结果
            3.3.2.1 阳性样品电泳结果
            3.3.2.2 最佳表达时间的确定
            3.3.2.3 最佳表达IPTG浓度的确定
            3.3.2.4 最佳诱导表达温度的确定
            3.3.2.5 表达形式的检测
            3.3.2.6 Western blot鉴定
            3.3.2.7 蛋白纯化结果
    3.4 讨论
第四章 结论
参考文献
附录1
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]山东部分地区肉鸭群鸭圆环病毒血清学调查[J]. 王鑫,相琪旺,朱岩丽,谢之景,陈君豪,周国梅,成岩,姜世金.  中国预防兽医学报. 2012(07)
[2]鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定[J]. 张兴晓,邹金峰,相琪旺,王鑫,陈琳,谢之景,姜世金.  西北农业学报. 2012(03)
[3]鸭圆环病毒LAMP可视化检测方法的建立[J]. 赵光远,谢芝勋,谢丽基,庞耀珊,邓显文,刘加波,范晴.  中国动物检疫. 2012(03)
[4]鸭圆环病毒抗体的间接ELISA检测方法的建立[J]. 苏小东,曹瑞兵,张羽,刘文娟,陈昊,祝长青,陈溥言.  南京农业大学学报. 2011(05)
[5]广西部分地区鸭圆环病毒感染情况调查[J]. 屈素洁,粟艳琼,郑敏,覃勇,莫胜兰,陆文俊,梁媛,严斯刚.  中国畜牧兽医. 2010(11)
[6]鸭的免疫抑制病[J]. 黄瑜,祁保民,彭春香,施少华,万春和,傅光华,程龙飞,林芳,林建生,陈红梅.  中国兽医杂志. 2010(07)
[7]鸭圆环病毒PT07基因组序列测定与分析[J]. 施少华,傅光华,程龙飞,陈红梅,万春和,陈珍,彭春香,林芳,黄瑜.  中国预防兽医学报. 2010(03)
[8]鸭圆环病毒感染的检测[J]. 施少华,万春和,陈珍,傅光华,江斌,程龙飞,陈红梅,彭春香,林芳,林建生,黄瑜.  中国家禽. 2010(01)
[9]我国自然发病鸭群中鸭圆环病毒的流行病学调查[J]. 刘少宁,张兴晓,陈智,高继明,魏秀丽,孔义波,朱岩丽,姜世金.  中国兽医学报. 2009(11)
[10]鸭圆环病毒基因组序列分析及其C1截短基因的原核表达[J]. 施少华,陈珍,杨维星,傅光华,程龙飞,陈红梅,彭春香,黄瑜.  中国兽医学报. 2009(10)

硕士论文
[1]鸭圆环病毒广西株的全基因序列分析及其分子生物学检测方法的建立[D]. 赵光远.广西大学 2012
[2]鸭圆环病毒核酸探针检测方法的建立及Cap蛋白核定位信号的研究[D]. 邹金峰.山东农业大学 2011
[3]鸭圆环病毒的流行病学调查[D]. 刘少宁.山东农业大学 2009



本文编号：3509820